1 Общие положения, приготовление питательных сред в лабораторных и

Техника приготовления основных питательных сред

1 Общие положения, приготовление питательных сред в лабораторных и

Для культивирования микробов влабораторных усло­виях готовятпитательные среды с учетом потребностив питательных веществах каждого видав отдельности. Питательная среда в своемсоставе должна содержать углерод,водород, кислород, азот, фосфор, серу,магний, железо, микроэлементы ибиостимуляторы роста.

Различают питательные среды естественные(молоко, яйца, картофель и т. п.),искусственные,приготовленные изпродуктов животного или раститель­ногопроисхождения, исинтетические(среды Чапека, Сабуро). По консистенциисреды могут быть жидкими, полужидкимии плотными.

Для приготовления плотных сред в жидкиесреды добавляют агар-агар или желатин.Агар-агар представляет собой продуктпереработки высушенных морских водорослейрода анфельция, состоящий в основномиз полисахаридов.

В холодной водеагар-агар набухает и размягчается, вгорячей (90—100° С) расплавляется, образуяклееобразную массу. Застывает агар-агарпри 40° С, образуя студень.

Как питательное вещество агар-агар микробами не используется.

Желатин получают путем вывариваниякожи, костей и сухожилий животных. Принагревании с водой желатин образуетколлоидный раствор, застывающий при18—20° С в однородный коллоидный студеньи рас­плавляющийся при 25—27° С.

В бактериологической практике обычноприменяют среды из продуктов животногои растительного происхождения, содержащиепептоны, экстрактивные вещества мяса,кровь, сыворотку, сусло, углеводы и т.п.

Необходимые питательные вещества должнысодержаться в среде в доступной формеи в определенных соотношениях.

Питательные среды должны быть стерильными(должно быть обеспечено получение чистыхкультур микроорганизмов), прозрачными(выросшие на них мик­роорганизмыдолжны быть хорошо видны и иметьопре­деленную величину рН).

Хранят готовые среды в прохладном месте,в плотно закрывающихся шкафах илиящиках, что предохраняет их от быстроговысыхания. Надолго хранившихся средахмикробы развиваются слабо или совсемне растут.

Питательные среды принято делить натри группы:

1) стандартные (универсальные) —предназначаются для культивированиябольшинства микробов;

2) специальные элективные, избирательные— предназначаются для выращиваниятолько определен­ного вида микробов,рост других микроорганизмов на этихсредах подавляется;

3) дифференциально-диагностические —предназначаются для изучения биохимическихсвойств микробов с цельюдифференцирования различных видов микроорганизмов.

Стандартные питательные среды

Мясопептонный бульон (МПБ).В состав МПБ входят мясная вода, пептон и поваренная соль. Для приготовления мясной воды используют свежее мясо крупного рогатого скотаили лошадей. Мясо освобождают от костей,жира и сухожилий и пропускают черезмясорубку.

Полученный фарш заливаютводой из расчета 1:2 (например, 1 кг фаршазаливают 2 л воды). Ставят на 18—20 ч впрохладное место (4—6° С), затем кипятятв течение часа и фильтруют черезватно-марлевый фильтр.

Фарш отжимают,к фильтрату добавляют воды допервоначального объема, разливают егопо колбам или бутылям и стерилизуют вавтоклаве при избыточном давлении 0,1МПа в течение 30 мин. Или заливаютдвукратным количеством воды, кипятятв тече­ние часа, дают остыть, фильтруютчерез ватно-марлевый фильтр.

Фаршотжимают, к фильтрату добавляют водыдо первоначального объема и стерилизуютего в течение 30 мин при избыточномдавлении 0,1 МПа.

При варке мясной воды на поверхностижидкости появляется некоторое количествожира, который необхо­димо снять.

Для приготовления МПБ к мясной водедобавляют 1% пептона и 0,5% химическичистой поваренной соли, кипятят 10 мин,фильтруют через бумажный фильтр,устанавливают рН 7,2—7,4 прибавлениемщелочи или двууглекислой соды и сновакипятят 10 мин.

Профильтрованный бульондолжен быть цвета соломы и совершеннопрозрачным. Бульон разливают по пробирками колбам, закрывают ватными пробками,пробки обвязывают пергаментной бумагойи стерилизуют 20—30 мин при избыточномдавлении 0,1 МПа.

Мясопептонный агар (МПА). Кмясопептонному бульону добавляют 2—3%нарезанного агар-агар; нагревают вавтоклаве или в текучепаровом аппаратедо полного расплавления агар-агара.Устанавливают рН 7,2—7,4. Дают остыть до50° С, осветляют путем добавления белкаодного куриного яйца, разведенногодвойным количеством дистиллированнойводы .

Ставят на 20 мин в автоклав приизбыточном давлении 0,1 МПа для свертываниябелка и тем самым осветляют среду,фильтруют через слой марли и ваты (рис. 1). Можно пользоваться другой методикой.К мясопептонному бульону добавляют2—3% нарезанного агар-агара, нагреваютдо полного расплавления его.

Послеостывания застывший плотный агарвынимают из посу­ды и отрезают нижнюючасть, содержащую осадок. За­тем вновьрасплавляют, разливают по пробирками стерилизуют при избыточном давлении0,1 МПа в течение 20 мин.

Необходимо, чтобыпрозрачность агара позволяла свободночитать напечатанный на бумаге шрифтпри наложении на него бактериологическойчашки с агаром, налитым слоем толщиной20 мм. После стерилизации для того,чтобы агар в пробирках застыл столбиком,их оставляют в вертикальном положении.

Если нужно при­готовить агар скошеннойформы, пробирки с расплавлен­нымагаром располагают в наклонном положениитак, чтобы среда заняла две третипробирки, и в таком виде оставляют дозастывания среды (рис. 2). При этомпро­бирки необходимо предохранятьот действия солнечного света.

Мясопептонный желатин (МПЖ).Кмясопептонному бульону добавляют 10%зимой и не менее 18—20% летом измельченногожелатина и подогревают в текучепаровомаппарате до полного растворения желатина.Подщелачивают среду до рН 7,2 путемдобавления 10%-ного раствораNaОН.

После охлаждения до 60° С осветляютяичным белком (в таком же количестве,как и для МПА), подогревают в текучепаровомаппарате 20—30 мин. В горячем виде фильтруютчерез ватный или марлевый фильтр иразливают по пробиркам.

Стери­лизуютдробно по 15—20 мин три дня подряд притемпературе 100° С.

Картофельная среда.Отбираюткрупный картофель, промывают щеткойпод водопроводной водой, удаляюткожуру и поврежденные места. Клубниснова моют под струей водопроводной воды и помещают в 1%-ный раствордвууглекислой соды на 2—3 ч дляней­трализации кислой среды. Изкартофеля пробником вырезают столбики,диаметр которых должен соответство­ватьширине пробирок.

Столбики помещают вчашки с водой и разрезают по диагоналина две части, подсуши­вают фильтровальнойбумагой и половинки помещают в пробиркис перехватом внизу (в нижнюю часть этихпробирок стекает вода, выделяемая пристерилизации). За неимением специальныхпробирок используют обыч­ные пробирки,поместив на дно стеклянные или деревян­ныепалочки, а на них — картофель.

Стерилизуютпри избыточном давлении 0,1 МПа в течение20—25 мин.

Пептонная вода. Приготовляют ееразличными способами. В 1 л дистиллированнойводы растворяют 5 г химически чистойповаренной соли и 10 г пептона и сте­рилизуютв автоклаве при избыточном давлении0,1 МПа в течение 10 мин.

Для выращиваниягнилостных бактерий пептонную водуготовят несколько иначе: в 1 лди­стиллированной воды растворяют30 г пептона. Стерили­зуют при избыточномдавлении 0,1 МПа в течение 20 мин.Концентрированная глюкозопептоннаясреда.

В 1 л воды растворяют 100 г пептонаи 50 г поваренной соли, нагревают докипения, отфильтровывают, добавляют 50г глюкозы, устанавливают рН 7,4— 7,6 (спомощью насыщенного раствора углекислойсоды), разливают по 10 мл в колбы и склянкиемкостью 250 мл с поплавками и стерилизуют3 дня по 30 мин текучим паром. Разведенная глюкозопептонная среда.

В 1 л водырастворяют 10 г пептона и 5 г повареннойсоли, нагревают до кипения и добавляют5 г глюкозы. Устанавливают рН среды7,4—7,6, разливают по 10 мл в пробирки споплавками и стерилизуют 3 дня по 30 минтекучим паром.

Сухой питательный агар. Содержитрыбный или мясной бульон, агар, хлористыйи фосфорнокислый натрий. К 5 г порошкаагара добавляют 100 мл холод­нойдистиллированной воды.

Тщательновзбалтывают и нагревают при помешивании до полного растворения агара, не допуская пригорания.

По мере надобностираствор фильтруют, разливают по пробиркам, стерилизуют при избыточном давлении 0,1 МПа в течение 20 мин.

Источник: https://studfile.net/preview/4693550/page:5/

Белковой основой всех сред является питательный буль­он; в зависимости от состава среды остальные ингреди­енты добавляют к питательному бульону.

Существует два спо­соба приготовления основного питательного бульона: 1) на мясной воде с добавлением готового пептона – это так на­зываемый мясопептонный бульон; 2) на переварах продук­тов гидролиза исходного сырья при помощи ферментов (трип­сина – бульон Хоттингера, пепсина – бульон Мартена) или кислоты.

Приготовленные в лабораторных условиях гидролизаты раз­водят до нужного значения аминного азота (от 120 до 200 мг%) и добавляют входящие в рецептуру среды ингредиенты, пред­варительно отвешенные на лабораторных весах.

Растворение. Подготовленные навески ингредиентов поме­щают в стеклянную колбу или кастрюлю, доливают требуемое количество бульона или дистиллированной воды, кипятят на электрической плитке до растворения всех компонентов, уста­навливают необходимое значение рН: сначала с помощью ин­дикаторной бумажки, а затем потенциометра.

Фильтрование. Жидкие питательные среды фильтруют через двойной складчатый фильтр из фильтровальной бумаги, пред­варительно смоченной водой, или через фильтровальное по­лотно, которое накладывают на стеклянную воронку.

Полот­няные фильтры значительно практичнее бумажных, так как годны к употреблению в течение длительного времени, в то время как бумажные фильтры употребляются лишь однократ­но.

Рекомендуется иметь отдельные полотняные фильтры для каждого вида среды.

Агаровые среды в расплавленном состоянии лучше всего фильтруются через ватно-марлевый фильтр: стеклянную во­ронку покрывают марлевой салфеткой такого размера, чтобы концы салфетки были перекинуты через края воронки наружу; затем на марлю кладут слой гигроскопической ваты, фильтр смачивают горячей дистиллированной водой. Агар наливают на фильтр горячим.

Желатиновую среду фильтруют через бумажный фильтр, предварительно смоченный дистиллированной водой. Жела­тельно фильтрацию производить быстро в теплом помеще­нии.

Розлив сред. После осветления и фильтрации питательные среды разливают в колбы, флаконы, пробирки, бутыли или матрацы.

Для разливки жидких питательных сред пользуются одной из описанных ниже установок.

  • На конец воронки, закрепленной в кольце штатива, наде­вают резиновую трубку, оканчивающуюся стеклянным на­конечником. На резиновую трубку накладывают зажим Мора. Под воронку подставляют сосуд для приема про­фильтрованной среды.
  • • Для отмеривания и разливки определенных объемов среды пользуются градуированной бюреткой или собирают специ­альную установку (рис. 7.2). Стеклянную воронку и граду­ированную бюретку соединяют резиновыми трубками с двумя коленами стеклянного тройника, на третье его колено надевают резиновую трубку, заканчивающуюся стеклянным наконечником. На резиновые трубки, соединяющие ворон­ку с тройником, и наконечник накладывают зажимы Мора. Ослабляя первый зажим, наполняют градуированный ци­линдр жидкостью, затем, открыв второй зажим, выпускают отмеренное количество жидкости в сосуд для питательной среды. Первые порции жидкости до вы­теснения воздуха из трубок не учитываются.

При розливе сред края посуды нельзя смачивать питательной сре­дой, так как ватно-марлевые пробки, Приклеиваясь к стеклу во время сте­рилизации, вынимаются с трудом и оставляют в просвете отверстия сосу­да остатки ваты. Попадая в среду, они могут вызывать загрязнение ее посторонней микрофлорой.

Поверх ватно-марлевой пробки на колбы и флаконы с питательными сре­дами надевают бумажные колпачки.

Разливка плотных стерильных пи­тательных сред в чашки Петри. Плот­ную питательную среду (агар, жела­тин) во флаконах или пробирках рас­тапливают в водяной бане (сняв предварительно бумажные колпач­ки).

Среду охлаждают до температуры 45–50 °С, сосуд берут в правую руку, левой рукой над огнем вынимают пробку и держат ее между мизинцем и ладонью, а края флакона или пробирки обжигают.

Открытую посуду со средой держат в на­клонном положении, чтобы избежать попадания в среду мик­робов из воздуха. В асептических условиях вносят стерильную кровь, сыворотку или другие необходимые добавки, тщательно перемешивают содержимое сосуда.

Левой рукой приподнимают с одной стороны крышку чашки Петри и выливают в нее питательную среду в количестве 15–20 мл, слегка покачивая чашку, чтобы среда распределялась равномерным слоем по ее поверхности (рис. 7.3).

В настоящее время ряд фирм изготовляют приборы-авто­маты для разливки агаризованных сред в чашки Петри, обес­печивающие высокую стерильность и точное дозирование разливаемых сред. Один из таких приборов изображен на рис. 7.4.

При застудневании агара образуется большое количество конденсационной воды, которая оседает на внутренней сторо­не крышки и увлажняет поверхность среды.

В связи с этим перед посевом среды подсушивают: чашку в открытом виде помещают в термостат таким образом, чтобы крышка служила опорой для края ее дна, перевернутого средой вниз.

Чтобы избежать образования конденсированной влаги, чашки с расплавленным агаром тотчас после заливки накрывают листом фильтровальной бумаги, которую стерилизуют вместе с чаш­кой. Бумага не должна касаться поверхности среды. Когда среда окончательно остынет, фильтровальную бумагу снимают, а чашки закрывают крышками.

Стерилизация питательных сред. Стерилизацию питательных сред осуществляют различными способами в зависимости от тех ингредиентов, которые входят в их состав.

  • Синтетические среды и все жидкие и агаровые среды, не содержащие в своем составе нативного белка и углеводов, стерилизуют 15 мин в автоклаве при температуре 121 °С.
  • Среды с углеводами и молоком (в состав которого входит лактоза), питательный желатин стерилизуют текучим паром при температуре 100°С дробно или в автоклаве при 110 – 112°С.
  • Среды, в состав которых входят белковые вещества (сыво­ротка крови, асцитическая жидкость или антибиотики и другие добавки), стерилизуют фильтрованием или стериль­ные вещества добавляют в питательные среды ex tempore.

Для стерилизации питательных сред, содержащих в своем составе нативные белки, пользуются фильтрацией через мем­бранные фильтры, изготовляемые различными фирмами.

Приготовленные к употреблению стерильные питательные среды проверяют на стерильность. Для этого их ставят в термо­стат при температуре 37 °С. Среды, простерилизованные в ав­токлаве, выдерживают в термостате 1 сут, простерилизованные текучим паром – 3 сут.

Источник: https://petritest.ru/spravochnik-mikrobiologa/labinskaya-obshchaya-i-sanitarnaya-mikrobiologiya/7-6-prigotovlenie-pitatelnykh-sred-v-laboratornykh-usloviyakh

Лабораторная работа 1 приготовление и стерилизация питательных

1 Общие положения, приготовление питательных сред в лабораторных и

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1 ПРИГОТОВЛЕНИЕ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД, ПОСУДЫ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА Цель работы: Ознакомиться с требованиями, предъявляемыми к питательным средам, с различными классификациями и химическим составом питательных сред, правилами их приготовления и целью использования. Приобрести навыки подготовки посуды для проведения микробиологических исследований. Ознакомиться с различными способами стерилизации питательных сред, посуды, инструментов, с устройством парового стерилизатора и принципом его работы.

КРАТКИЕ ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ПОЛОЖЕНИЯ 1. 1. 1 Питательные среды Разнообразные питательные вещества, в которых нуждаются микроорганизмы и которые используются ими для синтеза основных компонентов клетки, роста, размножения и для получения энергии называются питательными веществами, а среда, содержащая питательные вещества, является питательной средой.

По типу питания микроорганизмы, которые встречаются в пищевых продуктах, относятся к хемоорганогетеротрофам. Это значит, что органические вещества, содержащиеся в питательной среде, являются источником углерода, энергии и электронов. В качестве источника углерода микроорганизмы используют углеводы, органические и аминокислоты, спирты, липиды и т. д.

Органические вещества и вода являются также основными источниками водорода и кислорода.

Источником азота для хемоорганогетеротрофов могут быть различные органические и минеральные соединения: белковые вещества, пептоны, аминокислоты, соли аммония, нитраты. В среде обязательно должны присутствовать макроэлементы (Р, S, Ca, Mg, K, Fe, Na, Cl), которые вносятся в питательную среду в виде катионов питательных солей.

Для многих микроорганизмов нужны в малых дозах факторы роста.

Факторы роста обязательно вносят в среды для культивирования ауксотрофных микроорганизмов, а также добавляют в питательные среды для ускорения роста микроорганизмов.

К факторам роста относятся отдельные аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, жирные кислоты, витамины и др. , а также природные субстраты, содержащие эти соединения.

Питательные среды имеют исключительное значение в микробиологии. Правильный подбор питательной среды обеспечивает: 1. возможность выделения микроорганизмов из мест обитания; 2. получения накопительных и чистых культур, изучения их морфологии и биохимических особенностей; 3.

способствует быстрой и правильной диагностике инфекционных заболеваний; 4. дает возможность для количественного учета микроорганизмов в различных объектах; 5.

с помощью питательных сред получают также биомассу полезных для народного хозяйства микроорганизмов и биологически активные целевые продукты.

Требования, предъявляемые к питательным средам 1. В среде должны быть все необходимые для роста и развития химические элементы; 2. Среда должна быть сбалансирована по химическому составу. 3.

Среды должны иметь достаточную влажность, обеспечивающую возможность диффузии питательных веществ в клетку. 4. Среда должна иметь определенное значение р. Н среды.

Микроорганизмы Ацидофилы (кислотолюбивые): грибы и дрожжи Алкалофилы (щелочелюбивые) Нейтрофилы (лучше всего растут в нейтральной среде с p. H около 7, 0): большинство бактерий

5. Среды должны быть изотоничными для микробной клетки, т. е. осмотическое давление в среде должно быть таким же, как внутри клетки. 6. Среды должны обладать определенным окислительно-восстановительным потенциалом (rh 2), определяющим насыщение ее кислородом. 7. Среды должны быть стерильными, что обеспечивает рост чистых культур микроорганизмов.

Классификация питательных сред 1.

По консистенции Среды Жидкие применяются для накопления биомассы или продуктов обмена микроорганизмов, для обновления долго хранящихся культур Плотные необходимы для выделения и описания культуральных свойств чистых культур микроорганизмов, а также для количественного учета микроорганизмов в пищевых продуктах, других объектах внешней среды и для хранения чистых культур. Сыпучие применяют в основном в промышленной микробиологии и используются для культивирования аэробных микроорганизмов

Плотные среды готовятся из жидких путем добавления гелеобразующих веществ: агар -агара, желатина, геля кремнекислого (силикагеля). • Лучшим гелеобразующим веществом является агар-агар, получаемый из водорослей.

Это сложный полисахарид, который образует гель с точкой плавления 96 -100 0 С и температурой застывания около 40 0 С.

• В отличие от агар-агара желатин – это вещество белковой природы, которое получается из костей и хрящей животных при их вываривании, поэтому многие микроорганизмы используют желатин в качестве питательного субстрата и к концу культивирования среда с желатином разжижается.

• Если требуется получить плотные среды, не содержащие, органических компонентов, или синтетические среды с определенным количественным и качественным составом, то в качестве уплотнителя применяют кремневокислый гель.

2. По происхождению и составу Среды натуральные (естественные) используют для выращивания микроорганизмов, накопления биомассы, хранения чистых культур (отвары злаков, трав, овощные и фруктовые соки, различные экстракты, мясной бульон, автолизат дрожжей, молоко, молочная сыворотка, гидролизаты из растительного сырья и т. д.

синтетические (искусственные) применяются для исследования обмена веществ, выяснения закономерностей роста или биосинтеза какого-либо метаболита и т. д. (в практической работе используют синтетическую среду Чапека для выращивания грибов и среду Ридер для дрожжей.

) полусинтетические Цель использования полусинтетических сред та же, что и синтетических

3. По назначению Среды универсальные (основные) используются для выращивания многих видов микроорганизмов. избирательные (накопительные, элективные) обеспечивают развитие только определенных микроорганизмов или группы родственных видов и непригодны для роста других.

В такие среды, как правило, добавляют вещества, избирательно подавляющие развитие сопутствующей микрофлоры дифференциальнодиагностические используются для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ.

Состав этих сред позволяет четко выделить наиболее характерные свойства изучаемого микроорганизма.

1. 1. 2 Методы стерилизации питательных сред, посуды, инвентаря Стерилизацией или обеспложиванием (sterilis – бесплодный) называется полное уничтожение микроорганизмов в питательных средах, посуде и других объектах.

Стерилизация должна обеспечивать уничтожение всей микрофлоры, патогенной и непатогенной, присутствующей в данном объекте.

В зависимости от физических свойств стерилизуемых объектов и цели стерилизации применяют различные методы обеспложивания: горячие (влажная, дробная, сухая стерилизация) и холодные (механическая стерилизация, ионизация, стерилизация ультразвуком, ультрафиолетовыми лучами).

Методы, основанные на термической обработке стерилизуемых объектов Губительное действие высокой температуры обусловливается повреждением коллоидного состояния плазмы, денатурацией белка с последующей коагуляцией его, а также нарушением ферментных систем микроорганизмов. Различают влажные и сухие способы тепловой стерилизации.

Влажные способы используются, главным образом, для стерилизации питательных сред. К таким способам относятся стерилизация паром под давлением, стерилизация текучим паром (дробная стерилизация) и тиндализация.

• Стерилизация паром под давлением – самый эффективный в бактериологической практике способ стерилизации питательных сред и посуды, так как с его помощью быстро достигается полное и надежное обеспложивание. • Стерилизация текучим паром используется для сред, которые нельзя нагревать выше температуры 100 0 С.

Стерилизация проводится при 100 0 С (температура парообразования) по 30… 60 минут в течение 3 дней с промежутками в 18 -20 часов, во время которых материал выдерживается в термостате или при комнатной температуре. Поэтому этот способ называют еще дробной стерилизацией. • Тиндализация – это дробная стерилизация при низкой температуре – 56… 58 0 С.

Применяют этот способ при стерилизации сред, которые нельзя нагревать до 100 0 С. Такие среды подвергают нагреванию в течение 5… 6 дней подряд по 1 часу ежедневно (в 1 -й день – в течение 2 часов).

Сухие способы. При работе в микробиологической лаборатории из сухих способов термической стерилизации используются следующие: • Прокаливание на огне (фламбирование) очень быстрый и надежный способ стерилизации бактериологических петель, препаровальных игл перед посевами.

Этим способом можно стерилизовать также мелкие металлические предметы (пинцеты, скальпели) и предметные стекла. Осуществляют прокаливание над пламенем горелки. • Стерилизация сухим жаром (сухим нагретым воздухом) используется для стерилизации микробиологической посуды (пипеток, чашек Петри), песка.

Осуществляют стерилизацию сухим жаром при температуре 150170 0 С в течение 1… 1, 5 часов в печах Пастера или в сушильных шкафах.

Методы холодной стерилизации • Механическая стерилизация (фильтрование). Этот способ применяется для стерилизации сред в тех случаях, когда их нельзя подвергать нагреванию.

При механической стерилизации стерилизуемые жидкости фильтруют через специальные фильтровальные приборы, которые имеют настолько мелкие поры, что на своей поверхности задерживают взвешенные в жидкости частицы, в том числе и микробы. • Химическая стерилизация.

Этот вид стерилизации в практике приготовления питательных сред имеет ограниченное применение. В лабораторной практике используют некоторые химические вещества, такие как толуол, хлороформ, эфир и другие, для предупреждения бактериального загрязнения питательных сред.

Для освобождения от консерванта среду нагревают на водяной бане при 56 0 С. • Стерилизация ультрафиолетовыми лучами. Этот способ стерилизации используется для стерилизации воздуха в микробиологическом боксе и в лаборатории перед проведением микробиологических исследований.

1. 1. 3 Устройство парового стерилизатора и принцип его работы Устройство стерилизатора Основными частями стерилизатора являются: • стерилизационная камера; • парогенератор; • система трубопроводов; • электрошкаф; • манометр электроконтактный; • моновакуумметр; • клапан предохранительный; • колонка водоуказательная (водомерная трубка); • вентили.

Принцип действия пневмогидравлической и электрической систем парового стерилизатора Заключается в следующем: Вода поступает по водопроводу в парогенератор. Контроль за уровнем жидкости в парогенераторе осуществляют с помощью водомерной трубки. После включения стерилизатора, начинают нагреваться тэны, благодаря чему вода нагревается до рабочей температуры.

В результате образуется пар. При достижении в парогенераторе давления пара 0, 11 МПа открывается вентиль «Пар в камеру» и вентиль «Слив конденсата» . Происходит продувка и прогрев стерилизационной камеры, после чего вентиль «Слив конденсата» закрывается.

При достижении в стерилизационной камере рабочего давления (контролируется электроконтактным манометром) происходит отчет времени стерилизации. В процессе стерилизации происходит автоматическое включение и отключение стерилизатора с помощью электроконтактного манометра. Контроль за давлением в стерилизационной камере осуществляется моновакуумметром.

После проведения стерилизации аппарат отключают от сети и перекрывают вентиль «Пар в камеру» . Далее, по мере падения давления в стерилизационной камере до 0, 06 МПа (контроль осуществляется по моновакуумметру) открывается вентиль «Вакуум» . В стерилизационной камере создается разряжение. Происходит процесс сушки стерилизуемого материала.

По истечении сушки открывается вентиль «Воздух в камеру» . При этом происходит выравнивание давления в стерилизационной камере с атмосферным давлением.

1. 2. 1 Приготовление посуды для проведения микробиологического анализа Для проведения микробиологического анализа используют чашки Петри, которые герметично упаковываются в пергаментную бумагу и стерилизуются. Пипетки на 1 см 3 закрывают ватными тампонами и также заворачивают в бумагу.

Колбы закрывают ватно-марлевыми пробками и сверху делают колпачки из пергаментной бумаги. Стерилизация посуды осуществляется в автоклаве при избыточном давлении 0, 1 МПа в течение 30 -40 минут или сухим жаром в сушильном шкафу или печи Пастера при 165 -170 0 С в течение 1 -1, 5 часа.

Стерильную посуду следует хранить в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками в течение не более 30 суток.

1. 2. 2 Приготовление питательных сред из промышленно выпускаемых сухих сред Заключается в растворении определенного количества порошка в воде, доведении полученной смеси до кипения и кипячении в течение 5 минут.

Далее (при необходимости) среда фильтруется через ватно-марлевый фильтр и разливается в пробирки или колбы, которые закрываются ватномарлевыми пробками. Далее среды стерилизуют в автоклаве.

С использованием сухих сред готовят мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), среду Сабуро, среду Кесслера, среду для определения мезофильный аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (среда для определения КМАФАн. М), среду Эндо и др.

Среды для культивирования дрожжей и микроскопических грибов Картофельно-глюкозный агар 1. Очищенный и нарезанный ломтиками картофель массой 200 г заливают 1 л дистиллированной воды и кипятят в течение 1 часа; 2. Отвар фильтруют; 3.

К фильтрату добавляют воду до первоначального объема, 2% глюкозы (4 грамма), 2 -3% агар-агара (4 -6 грамма); 4. Среду разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при 0, 1 МПа в течение 10 минут; 5. При употреблении устанавливают р.

Н 3, 5 при помощи 10%-го стерильного раствора безводной лимонной кислоты.

Кипятим картофель в течение 1 часа Фильтруем отвар Добавляем воду

Отмеряем нужное количество глюкозы и агар-агара В первой колбе раствор доведен до р. Н 3. 5, во торой колбе р. Н ≈ 7 1 2

Источник: https://present5.com/laboratornaya-rabota-1-prigotovlenie-i-sterilizaciya-pitatelnyx/

Medic-studio
Добавить комментарий