3 Методы определения соматических клеток: 3.1 Экспресс-метод определения соматических клеток в молоке на

Соматические клетки являются постоянным составным элементом молока и представлены:

  • эпителиальными клетками слизистой оболочки молочных же­лез, альвиол и мелких молочных ходов, представляющих собой крупные полигональные или округлые клетки (размером от 12 до 100 мкм и более) обычно в виде групп или пластов, реже в виде единичных клеток;
  • дегенерированными эпителиальными клетками неопределенной формы разрушенной структуры;
  • форменными элементами крови: лейкоцитами (в основном лим­фоцитами, нейтрофилами, эозинофилами и др.) и эритроцитами.

Морфолого-цитологический состав и количественное содержание соматических клеток в молоке подвержены значительному варьиро­ванию и зависят от возраста животных, периода лактации, состояния здоровья животных (особенно от состояния вымени), уровня и режи­мов кормления и др.

Накопленные к настоящему времени многочисленные данные сви­детельствуют, что в молоке здоровых коров лактационного периода, полученном из здоровых четвертей вымени, количество соматических клеток (КСК) не превышает 500 тыс/см3. Минимальный уровень со­матических клеток (до 200 тыс.

/см3) характерен для молока между 60 и 180 днями лактации, затем КСК возрастает, но до 270 дней лакта­ции не превышает 500 тыс/см3. Повышенный уровень соматических клеток отмечается с увеличением возраста животных. По данным К. Д.

Буткус, если среднее КСК в молоке здоровых животных первой лактации составляет около 200 тыс/см3, то в молоке четвертой стадии лактации может достичь 800 тыс/см3.

Высокий уровень соматических клеток (несколько миллионов/см3) характерен для молозива и молока первых удоев. В первые 5–10 дней после отела происходит снижение КСК с нескольких миллионов/см3 до нормального, составляющего 100–500 тыс/см3.

Увеличенное КСК (достигающее значений нескольких млн/см3) ха­рактерно и для стародойного молока. Однако еще в 1908 г. было по­казано, что высокий уровень КСК в молоке лактационного периода (превышающий 500 тыс/см3) обусловлен маститными заболеваниями. К настоящему времени связь КСК в молоке с маститами не вызывает сомнения.

Следует отметить, что молоко с содержанием соматических клеток более 500 тыс/см3 не пригодно для переработки на сыр. Это связано с серьезными изменениями химического состава и физико-химических свойств молока, делающими его несыропригодным. В частности, при повышенном уровне соматических клеток (более 500 тыс/см3) в молоке:

  • наблюдается уменьшение титруемой кислотности (до 13–10 °Т), увеличение рН (до 7,0-7,2 ед. рН);
  • на 5–7 % уменьшается массовая доля жира, возрастает число мел­ких шариков (диаметром 2–3 мкм);
  • изменяется состав молочного жира (повышается количество не­насыщенных жирных кислот);
  • увеличивается содержание общего белка (но за счет увеличения альбуминов и глобулинов), изменяются соотношения казеино­вых фракций;
  • на 10–20 % снижается уровень лактозы в молоке;
  • значительным изменениям подвергается минеральный состав молока: уровень натрия и хлора увеличивается на 20–35 %, а со­держание кальция и фосфора уменьшается на 20–25 %.

Описанные выше изменения химического состава молока отри­цательно сказываются на его технологических свойствах. В частно­сти, молоко с высоким уровнем соматических клеток по сычужно-бродильной пробе обычно оценивается III классом.

Интенсивность проявления описанных выше изменений пропор­циональна КСК в молоке. Особую опасность маститное молоко пред­ставляет с микробиологической точки зрения.

При переработке молока с высоким уровнем соматических клеток на сыр наблюдается:

  • увеличение продолжительности образования сгустка во время выработки сыра (в 2 раза);
  • формирование мягкого дряблого сгустка, плохо отдающего сыво­ротку;
  • формирование мягкого, плохо обрабатывающегося зерна;
  • ингибирование молочнокислого процесса во время созревания сырной массы;
  • изменение интенсивности и направленности основных биохими­ческих процессов (протеолиза и липолиза) во время созревания сыров.

В конечном итоге, попадание в сборное молоко даже 10 % анор­мального молока (маститного, стародойного) приводит:

  • к снижению выхода сыра;
  • к технологическим трудностям получения продукта с требуемы­ми характеристиками (в частности по массовой доле влаги);
  • к формированию мажущейся (или колющейся, грубой) конси­стенции;
  • к появлению несвойственного сырам привкуса и запаха, горького вкуса, усиливающегося во время созревания и хранения сыра.

Визуальный метод определения количества соматических клеток

Отбор проб молока и подготовка их к испытанию – по ГОСТ 13928.

Аппаратура и материалы:

  • весы лабораторные 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104;
  • прибор для отмеривания жидкости, тип 2 по ГОСТ 6859;
  • секундомер;
  • колбы 1-100-2, 2-100-2, 3-100-2, 4-100-2 по ГОСТ 1770;
  • цилиндры 1-100, 2-100, 3-100, 4-100 по ГОСТ 1770;
  • пипетки 1-1-1, 1-2-1 по ГОСТ 29169;
  • термометры стеклянные частичного погружения типа Б по ГОСТ 28498;
  • пластинки ПМК-1 молочно-контрольные;
  • термостат;
  • палочка деревянная, пластмассовая или стеклянная с оплавлен­ным концом диаметром не более 5 мм;
  • вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода питьевая по ГОСТ 2874 свежевскипяченная;
  • баня водяная;
  • препарат «Мастоприм» по ГОСТ 23455, раствор массовой кон­центрации 25 г/дм3.

Подготовка к анализу. Приготовление водного раствора препарата «Мастоприм»: 2,5 г препарата вносят в мерную колбу или цилиндр вместимостью 100 см3 и доливают до метки дистиллированной во­дой (или питьевой свежекипяченой водой), нагретой до температуры 30–35 °С. Раствор перед применением взбалтывают до равномерного распределения осадка.

Срок годности раствора – 1 сут при температуре хранения 10-30 °С.

Проведение анализа. В луночку пластинки ПМК-1 вносят 1 см3 тща­тельно перемешанного молока и добавляют 1 см3 водного раствора препарата «Мастоприм».

Молоко с препаратом интенсивно перемеши­вают деревянной, пластмассовой или стеклянной палочкой в течение 10 с.

Полученную смесь из луночки пластинки при непрерывном ин­тенсивном перемешивании поднимают палочкой вверх на 50–70 мм, после чего в течение не более 60 с оценивают результаты анализа.

Обработка результатов. Количество соматических клеток в исследуе­мом молоке устанавливают по консистенции молока в соответствии с требованиями табл. 39.

Таблица 39

Характеристика консистенции молокаКоличество соматических клеток в 1 см3 молока
Однородная жидкость или слабый сгусток, который слегка тянется за палочкой в виде нитиДо 500 тыс.
Выраженный сгусток, при перемешивании которого хорошо видна выемка на дне луночки пластинки. Сгусток не выбрасывается из луночкиОт 500 тыс. до 1 млн
Плотный сгусток, который выбрасывается палочкой из луночки пластинкиСвыше 1 млн

Метод определения количества соматических клеток в молоке с применением вискозиметра

Аппаратура и материалы:

  • весы лабораторные рычажные не ниже 4-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г по ГОСТ 24104;
  • вискозиметр ВМЛК, ВМП;
  • пипетки 2-2-5, 2-10, 3-2-5, 3-2-10 по ГОСТ 29169;
  • колбы 1-100-2, 2-100-2, 3-100-2, 4-100-2 по ГОСТ 1770;

Источник: https://petritest.ru/spravochnik-mikrobiologa/lyakh-kachestvo-moloka-spravochnik/3-15-o-somaticheskikh-kletkakh-v-moloke

Краткий сравнительный анализ методов определения содержания соматических клеток (ССК) в молоке. – статьи от ООО ЛонгТрейд

3 Методы определения соматических клеток: 3.1 Экспресс-метод определения соматических клеток в молоке на

соматических клеток в молоке (ССК) является важнейшим микробиологическим показателем качества молока, величина которого определяет сортность принимаемого молока. Подсчет соматических клеток используется во многих странах для установления цены на молоко, то есть, таким образом, оценивается его качество.

Прямым (арбитражным) методом измерения ССК является микроскопический – подсчет количества окрашенных соматических клеток под микроскопом. Этот метод трудоемкий и требующий достаточно высокой квалификации персонала.

Кроме того, погрешности этого метода зависят от многих факторов: количества образцов, их характеристик, а также характеристик используемого для подсчета оборудования.

  При этом средние значения погрешностей лежат в интервалах 10-15% на средних концентрация  СК (от 200-1000) и около 20-30% для низких концентраций (меньше 150).

Именно из-за трудоемкости и сложности применения микроскопического метода  большое распространение получили косвенные методы определения этого показателя.

К косвенным методам определения ССК относятся:

·         оптофлуороэлектрический

·         кондуктометрический

·         вискозиметрический

В настоящее время ряд зарубежных фирм предлагают на российском рынке автоматизированные установки для автоматизированного подсчета ССК  (подсчитываются окрашенные специальным реактивом ядра соматических клеток), основанные на современных достижениях оптофлуороэлектронного (биолюминесцентного) метода. Они включают в себя анализатор, персональный компьютер, специализированное программное обеспечение, а в некоторых случаях – устройство для автоматической подачи кювет с пробами.

Данные системы подходят для крупных лабораторий при заводах и так же требуют специальной подготовки персонала. К недостаткам этих систем можно отнести очень высокую стоимость – от 18 – до 60 тыс. Евро и выше, кроме того  постоянную потребность в дорогостоящих расходных материалах. 

Более доступным вариантом является счетчик соматических клеток DCC (DeLaval Cell Counter), основанном на том же принципе автоматического прямого подсчета количества соматических клеток.

Он позволяет за одну минуту измерить точное количество соматических клеток в каждой доле вымени коровы, а также в молочном танке. Прибор мобилен, вес его составляет 4,1 кг. Погрешность измерений при этом методе, по оценкам специалистов компании DeLaval, составляет 12% при 100 тыс. клеток/мл и до 7% при 1 млн клеток/мл.

Основной недостаток данного прибора его относительно высокая стоимость – порядка 3,5 тыс. евро, высокая стоимость расходных материалов (одноразовые кассеты), достаточно долгий срок окупаемости прибора. 

Еще одним косвенным методом определения соматических клеток является кондуктометрический метод, основанный на измерении электропроводности молока.

Известно, что при возникновении воспалительного процесса в вымени изменяется не только качественный состав молока, но и его физико-химические свойства, в частности электропроводность.

Для маститного молока характерно повышение содержания ионов хлора, что приводит к повышению его удельной электропроводности. 
Но приборы, использующие этот метод, служат скорее индикаторами изменения количества соматических клеток в молоке, нежели точными счетчиками.

Пример подобного прибора – «Милтек-1», с помощью его можно отследить динамику изменения электропроводности молока и соответственно динамику протекания заболевания маститом, но невозможно определить точное содержание соматических клеток в молоке.

Стоимость данного прибора – около 13 тысяч рублей, время измерения – всего несколько секунд, прибор компактный (помещается в руке) и работает от аккумулятора.

Подобные приборы полезны для ветеринарных врачей для быстрого определения мастита у животных в клинических  и субклинических формах, для быстрой сортировки здоровых и больных животных в стаде.

В приборах косвенного действия, основанных на вискозиметрическом методе (вискозиметрических анализаторах) измеряется вязкость молока.

Исследуемая проба молока смешивается со специальным препаратом «Мастоприм», который разрушает оболочки соматических клеток (лейкоцитов) и молекулы ДНК переходят во внеклеточное пространство, изменяя при этом вязкость смеси.

Чем больше соматических клеток содержится в исследуемой пробе молока – тем более вязкой будет смесь. Вискозиметрический анализатор измеряет скорость вытекания полученной смеси через специальный капилляр и выводит на экран результат в соответствии с градуировочной таблицей (соответствие времени вытекания и количества соматических клеток).

Время вытекания молочной смеси возрастает с ростом концентрации соматических клеток, и эта зависимость количественно определена таблицей ГОСТ РФ. №23453. Например, если молоко вытекло за 12 секунд, то показатель соматических клеток составляет около 90 тыс. СК / см3 (минимальное значение таблицы), а если за 58 секунд, то это уже 1500 тыс. СК / см3 (максимальное). 

К данным приборам относится вискозиметрический анализатор молока «Соматос-мини». Прибор прост в использовании и не требуют высокой квалификации лаборантов. Расходные материалы – препарат «Мастоприм», имеет довольно низкую стоимость, что приводит к низкой стоимости анализа, за счет чего прибор быстро окупается.

«Соматос-МИНИ» может использоваться на всех уровнях производства и приемки молока: от молочных ферм до пунктов приемки молока, от молочных заводов и молокоперерабатывающих предприятий до ветеринарных станций и станций СЭС.

Анализатор «Соматос-МИНИ» работает от электросети, не требует прогрева, после включения прибора он сразу готов к работе. Измерение каждой пробы занимает не более 4 минут. Погрешность данного метода – не более 5%. Стоимость анализатора  – 37 000 рублей.

По мнению пользователей, большое преимущество этих приборов заключается в том, что они не требуют использования дорогостоящих расходных материалов (препарат «Мастоприм» очень доступен по цене, а отличии от кассет с реактивами для приборов биолюминесцентного метода).

К минусам относят необходимость тщательной промывки стеклянной колбы прибора и капилляра, так как при некачественной промывке происходит увеличение погрешности измерения.

Тем не менее, применение таких счетчиков позволяет не только контролировать здоровье стада в целом, но и исключать конфликтные ситуации с переработчиками молока.

По отзывам многих клиентов применение вискозиметрического анализатора помогает  производителям молока вовремя предотвращать попадание некачественного молока от больной коровы в общий танк со сборным молоком, то есть повысить сортность и качество сдаваемого молока, а значит и увеличить прибыль.

Источник: http://longtrade.by/information/kratkii-sravnitelnii-analiz-metodov-opredeleniya-soderzhaniya-somaticheskix-kletok-ssk-v-moloke.html

Методы определения количества соматических клеток в молоке – Ижсинтез Химпром

3 Методы определения соматических клеток: 3.1 Экспресс-метод определения соматических клеток в молоке на

330 килограмм молочных продуктов в год – именно такое количество рекомендовано к потреблению всемирной ассоциацией здравоохранения! Но к этому выражению необходимо добавить еще одну фразу: 330 килограммов качественной молочной продукции! На качество продукции оказывает влияние множество факторов, в том числе показатель содержания соматических клеток в молоке. Методы определения количества соматических клеток в молоке бывают разными: показатель определяют с помощью специального оборудования, отдельных средств и методов подсчета.

Что представляют эти загадочные соматические клетки? Из этих клеток состоят все ткани и органы животного, а как известно, клетки регулярно обновляются, отмершие клетки попадают, в том числе, в молоко через процесс доения.

Наличие этих клеток не говорит о заболевании животного, они встречаются в молоке даже у самых здоровых особей. А вот завышенное значение показателей говорит о болезни вымени и может свидетельствовать о наличии у животного мастита.

К чему могут привести завышенные показатели:

·         В первую очередь теряется качество молока и нарушается его биологическая полноценность.

·         Ухудшаются и технологические свойства, переработка такого продукта довольна проблематична и при высоких показателях невозможна.

·         Снижается и кислотность готового продукта, теряется процент жирности, казеина и лактозы.

С помощью профилактики и грамотно выстроенного процесса производства, можно свести риски повышения этих показателей практически к 0. Использование для избавления от соматических клеток в молоке специальных очистителей не решает проблему.

Они служат, в первую очередь, для удаления механических загрязнений. В случае с соматикой, проблему представляют не сами клетки, а здоровье животных, о котором свидетельствует их повышение.

Это сигнал для производителя, что здоровье поголовья скота в опасности и надо принять меры.

Определение соматических клеток в молоке с помощью приборов

В разных странах свои требования к количеству содержания соматических клеток в молоке. Самый строгие в Австралии, количество соматики в молоке в этой стране разрешено до 80 тысяч на мл. при показателях в России до 750 тысяч.

Определение соматических клеток в молоке происходит, в том числе, и с помощью специальных приборов. Более простой и мобильный вариант – это профессиональные средства, которые показывают результат анализа буквально за несколько секунд.

Причиной повышения соматических клеток в молоке нередко бывает дефицит витаминов, в том числе группы E и селена. Именно эти элементы, согласно исследованиям, оказывает наибольшее влияние на здоровье вымени, повышают общий уровень сопротивляемости инфекциям.

Если все другие причины завышения показателей уже исключены, то советуем сделать анализ крови коров, который определить уровень содержания этих элементов и поможет скорректировать питание.

Добавление этих элементов в качестве дополнительной добавки в корм, даже при нормальных показателях соматики, будет не лишним.

Не стоит пренебрегать и обработкой вымени до и после доения. Эти процедуры должны быть обязательными в плане гигиенических мероприятий на ферме.

Определение соматических клеток в молоке по ГОСТу

Определение соматических клеток в молоке регламентируется по ГОСТ и привязано к сорту молока. ГОСТ устанавливает нам следующие показатели:

Высший сортПервый сортВторой сорт
2.5 * 10 54.0 * 10 5                    7.5 * 10 5

 Это показатели содержания соматических клеток на 1 кубический сантиметр. Чтобы определить завышены показатели соматики у животных на ферме или нет, мы рекомендуем средство ITALMAS SK-TEST от компании «Ижсинтез-Химпром». Как происходит тестирование:

·         Средство добавляется к молоку, сцеженному из каждого соска в отдельные лунки палитры.

·         По истечении 15 секунд и перемешивания молока и средства можно визуально определить завышены показатели или нет.

·         Образование геля свидетельствует о завышении соматики.

Как видите, средство крайне просто в использовании, но при этом исследования подтверждают его эффективность. Средство легко переносить, вы сможете максимально быстро проверить большое количество животных и сразу узнаете результаты.

При этом вам не потребуется привлекать для анализа сторонних специалистов и дорогостоящее оборудование. Для покупки переходите на сайт производителя: https://pk-izhsintez.

ru/product/soderzhanie-i-doenie-krs/opredelenie-somaticheskikh-kletok-v-moloke/italmas-sk-test/

Источник: https://pk-izhsintez.ru/poleznaya-informaciya/gigiena-vymeni-poleznaya-informaciya/metody-opredeleniya-kolichestva-somaticheskikh-kletok-v-moloke/

Переработка молока –

3 Методы определения соматических клеток: 3.1 Экспресс-метод определения соматических клеток в молоке на

  • более 1⋅106 клеток в 1 см3 молока свидетельствует о маститном молоке, которое приемке не подлежит.

    Большинство предприятий в настоящее время имеет возможность применять вискозиметры тех или иных производителей для контроля соматических клеток в молоке.

    При этом они имеют конкретные цифровые показатели в диапазоне от 9⋅104 до 1,5⋅106 клеток в 1 см3 молока.

    Однако наши исследования показывают, что на значения вискозиметров большое влияние оказывает фальсификация молока сырого как химическими веществами, так и путем воздействия температурой:

  • добавление в молоко перекиси водорода, мочевины, соды и других веществ, используемых для фальсификации тех или иных показателей молока-сырья, приводит к прямо пропорциональному снижению значений вискозиметра в зависимости от их концентрации;
  • любое нагревание молока до температур термизации или пастеризации приводит к сбою показаний прибора, и вискозиметр показывает значения менее 90 тыс. клеток в 1 см3 молока независимо от их истинного содержания. Эти особенности необходимо учитывать при анализе получаемых результатов. Опыт работы многих предприятий свидетельствует о том, что при контроле соматических клеток в молоке с использованием вискозиметра в журналах фиксируются значения менее 90 тыс. в 1 см3, которые специалисты, принимающие молоко на предприятии, считают нормой и относят данное молоко к высшему сорту. Такие выводы являются очень опасным заблуждением, так как в норме для сборного молока показатель соматических клеток менее 200 тыс. в 1 см3 у стада на территории РФ не наблюдается. Чтобы получить такой уровень соматических клеток в сборном молоке, необходимо иметь стадо перводоек в первые 3–4 мес после лактации. Показания вискозиметра менее 90 тыс. в 1 см3 говорят о фальсификации молока или об иных отклонениях от нормы. Существует косвенный метод определения соматических клеток в молоке сыром, основанный на принципе флуоресцентной микроскопии с использованием счетчика соматических клеток DCC фирмы DeLaval. В настоящее время данный метод не включен ни в один национальный стандарт, поэтому на основании законодательства РФ может использоваться только для проведения внутрипроизводственного контроля, а результаты анализов не могут быть использованы в случае арбитражных споров. Однако данный метод широко используется молочными хозяйствами в странах как Европы, так и Таможенного союза. В отделе микробиологии ВНИИМС в результате многолетней работы в рамках темы Россельхозакадемии «Создать систему контроля молока-сырья и разработать исходные требования к молоку-сырью для сыроделия» накоплен значительный экспериментальный материал по сравнительной оценке всех существующих методов определения соматических клеток. Это позволило, проведя статистический анализ результатов определения соматических клеток в молоке сыром разными методами, дать предложение о включении метода флуоресцентной микроскопии с использованием счетчика соматических клеток DeLaval DCC наряду с методами контроля по изменению вязкости в программу международной стандартизации. Сущность метода заключается в том, что цитоплазматическая мембрана соматических клеток разрушается под действием лизогенного буфера, после чего ядра клеток становятся доступными для действия флуоресцентного красителя, в качестве которого используется пропидий йодид (PropidiumIodide – PI). Пропидий йодид связывается с двухспиральной ДНК соматических клеток, и образуется флуоресцентное вещество, поглощающее зеленый свет и излучающее красный, идентифицирующее клетки. Таким образом, система дает изображение клеток, а встроенный в анализатор компьютер с помощью программного обеспечения подсчитывает количество белых точек, что соответствует количеству соматических клеток. Nucleo-кассета – одноразовое приспособление, состоящее из проточной системы, поршня и измерительной камеры, где непосредственно происходит анализ. Флуоресцентный краситель пропидий йодид зафиксирован в первых трех каналах проточной системы Nucleo-кассеты. При заполнении Nucleo-кассеты образцом молока оно смешивается с флуоресцентным красителем PI и клеточные ДНК окрашиваются. После размещения Nucleo-кассеты в приборе окрашенная смесь автоматически попадает в измерительную камеру. После анализа образец и PI остаются внутри Nucleo-кассеты, которую можно безопасно утилизировать. Это обеспечивает безопасное проведение анализа. Кроме того, использование Nucleo-кассет исключает необходимость очистки прибора и его технического обслуживания. В рамках данной работы проведены исследования влияния различных факторов на результаты определения количества соматических клеток, получаемые методом, основанным на принципе флуоресцентной микроскопии с использованием счетчика соматических клеток DCC фирмы DeLaval:
  • прослеживается пропорциональное снижение средних показателей количества соматических клеток в зависимости от температуры: чем выше температура обработки молока, тем ниже показатели. Следовательно, метод флуоресцентной микроскопии применим только для подсчета соматических клеток в сыром молоке, не прошедшем термическую обработку;
  • независимо от вида фальсифицирующего агента в пределах испытанных концентраций перекиси водорода и мочевины влияния химических агентов на показатели счетчика соматических клеток DCC не наблюдается;
  • повышение бактериальной обсемененности сырого молока не оказывает значимого влияния на результаты подсчета количества соматических клеток. Не установлено значимого влияния спор споровых анаэробов на показатели счетчика соматических клеток DCC.

    Сравнительная оценка результатов контроля количества соматических клеток в молоке параллельно тремя косвенными методами представлена в табл. 1. Как видно из табл. 1, доля проб молока, соответствующих требованиям безопасности, при анализе одной и той же выборки зависит от метода определения количества соматических клеток и его чувствительности.

    Сравнительная статистическая оценка методов определения количества соматических клеток в сыром молоке проведена с использованием непараметрического критерия знаков Z и критерия Уилкоксона Т.

    С вероятностью 95 % можно утверждать следующее:

  • определение количества соматических клеток как визуальным методом оценки вязкости, так и вискозиметрическим дает сопоставимые результаты;
  • при использовании для статистического анализа критерия знаков Z метод флуоресцентной микроскопии дает показатели, превышающие соответствующие значения, полученные вискозиметрическим методом.

    Однако при проведении статистической оценки с использованием рангового критерия Уилкоксона Т (данный критерий рассчитывается аналогично критерию знаков Z, но является более «мощным», чем критерий знаков) установлено, что при заданном уровне значимости невозможно отбросить нулевую гипотезу и, следовательно, данный критерий не выявляет статистически значимых различий в определении количества соматических клеток с помощью вискозиметра и счетчика соматических клеток.

    С учетом полученных данных в проект межгосударственного стандарта были включены три перечисленных косвенных метода контроля соматических клеток в молоке. Всероссийским научно-исследовательским институтом сертификации на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта создан ГОСТ Р ИСО 13366-1-2010 «Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 1. Метод с применением микроскопа (контрольный метод)», идентичный международному стандарту ИСО 13366-1:2008 «Молоко. Подсчет соматических клеток. Часть 1. Метод с применением микроскопа (контрольный метод)» [ISO 13366-1:2008 « M i l k – E nu m e r at i o n o f s o m at i ccel l s – Pa r t 1 : Microscopicmethod (Referencemethod)»]. Данный стандарт устанавливает метод подсчета соматических клеток с применением микроскопа в сыром и химически консервированном молоке. Использование этого стандарта сопряжено с применением опасных материалов, требует специального оснащения приборами и оборудованием. На пользователя данного стандарта возлагается вся ответственность по установлению надлежащих правил безопасности, охраны здоровья и определения применимости регулятивных ограничений, разработанных до использования. Подготовка и профессиональное мастерство микробиолога являются основными решающими факторами успешного использования метода. Для обеспечения надлежащего уровня подсчета необходимы как теоретические знания, так и большие практические навыки. Метод крайне трудоемкий, а время проведения одного анализа составляет не менее 3–4 ч. Результаты, полученные в рамках совместных международных исследований коровьего молока в 2005 г. при разработке стандарта ISO 13366-1:2008, в которых приняли участие 18 лабораторий из 13 стран, говорят о том, что данный метод может быть реализован только в условиях специализированных лабораторий. Подтверждением сказанного служат результаты анализа восьми проб молока в 18 контрольных лабораториях Европы. Данные испытаний показывают, что из 144 проб (по восемь проб в 18 лабораториях) пригодными для статистического анализа были признаны только 95, а 49 участников были исключены по причине резко отклоняющихся результатов. Есть негативные примеры использования данного метода в молочной промышленности, в частности на предприятиях Украины, пытающихся достичь гармонизации с международными стандартами и проверяющих правильность работы вискозиметров, сравнивая их результаты с описанным методом микроскопического подсчета соматических клеток. В отделе микробиологии ВНИИМС была проведена большая работа по оценке метода прямого микроскопирования соматических клеток в молоке в соответствии с упомянутыми стандартами. Всесторонняя оценка как самого метода, так и получаемых результатов при контроле одной и той же пробы молока разными операторами позволила нам сделать вывод о невозможности применения данного метода в условиях производственных лабораторий для контроля молока-сырья. Коротко данный метод можно охарактеризовать как крайне трудоемкий, опасный для здоровья, длительный и плохо воспроизводимый. Однако метод прямого микроскопирования является единственным прямым методом контроля, позволяющим увидеть, идентифицировать и сосчитать соматические клетки в молоке. Поэтому мы провели модификацию метода в целях его упрощения и снижения уровня опасности. Разработанный вариант метода прямого микроскопирования молока для подсчета соматических клеток может быть при необходимости использован как прямой контрольный метод в условиях производственных лабораторий и включен в проект межгосударственного стандарта. Данный метод мы не можем считать арбитражным, так как при его реализации основные риски связаны с субъективными факторами, в частности с квалификацией конкретного исполнителя.

    В табл.

    2 приведены результаты сравнительных исследований четырех образцов сырого молока на количество соматических клеток, определяемых с помощью прямого метода микроскопирования и косвенных методов: по изменению вязкости на вискозиметре «Соматос-МИНИ» (производитель – ООО ВПК «Сибагроприбор») и флуоресцентной микроскопии с использованием счетчика соматических клеток DCC (фирма DeLaval). Для оценки воспроизводимости результатов каждое определение было проведено дважды. Приведенные в табл. 2 результаты показывают, что при очень низком уровне содержания в молоке соматических клеток в данной серии опытов разброс данных значителен, однако укладывается в допустимую ошибку повторяемости 12 %. С увеличением в пробах количества соматических клеток результаты измерений, получаемые различными методами, сближаются. При содержании в молоке соматических клеток порядка 106/см3 метод прямого микроскопирования дает более высокие значения, чем косвенные методы контроля. Проводя сравнительную оценку методов определения количества соматических клеток, можно утверждать, что показатели, получаемые при оценке одних и тех же проб молока, зависят как от используемого метода, так и от уровня содержания соматических клеток в молоке. По результатам проведенной работы разработан проект стандарта на методы контроля соматических клеток в молоке сыром по изменению вязкости, флуоресцентной микроскопией и на модифицированный контрольный метод – прямой подсчет соматических клеток путем микроскопирования. Проект стандарта включен в программу международной стандартизации на 2013 г. Разработчик стандарта – ВНИИМС.

    Источник: Журнал “Переработка молока”

  • Источник: https://www.milkbranch.ru/publ/view/759.html

    Medic-studio
    Добавить комментарий