ИММУНОДИАГНОСТИКА: Иммунодиагностика злокачественных опухолей основана на реак­ции

Иммунодиагностика и иммунотерапия опухолей

ИММУНОДИАГНОСТИКА: Иммунодиагностика злокачественных опухолей основана на реак­ции

Иммунодиагностика рака основывается на индикации в крови раковых антигенов, обнаружении противоопухолевых антител и выявлении сенсибилизиро-ванных к опухолевым антигенам лимфоцитов.

На первом пути достигнуты существенные успехи при диаг­ностике тех форм опухолей, при которых идентифицированы конкретные эмбриональные антигены.

Обнаружение α1-фетопротеина у взрослого человека является диагностическим при­знаком наличия у него первичной гепатомы или тестикулярной тератобластомы. Обнаружение РЭА свидетельствует о наличии у больного аденокарциномы кишечника, желудка или пищевода.

У некоторых больных выявляются антитела против этого антигена. Следует, однако, иметь в виду, что обнаружение циркулирующих в крови тех или иных проти­воопухолевых антител относится к наименее достоверным иммунодиагностическим критериям.

Это связано с наличием в крови людей широкого спектра нормальных антител против ряда микробных и тканевых антигенов, которые могут обе­спечивать появление ложноположительных реакций.

Перспективно выявление сенсибилизированных лимфоцитов. Методику ингибиции роста колоний опухолевых клеток лимфоцитами опухоленосителя применяют при диагностике нейробластомы у детей.

Лимфоциты больных с нейробластомой ингибируют рост колоний опухолевых клеток данного типа, эксплантированных от другого индивидуума.

Эти же лимфоциты неактивны в отношении роста колоний клеток саркомы или других опухолей.

В самое последнее время получены гибридомы, продуцирующие, моноклональные антитела против конкретных опухолевых антигенов Начато их использование для диагностики опухолей. Это правление иммунодиагностики наиболее перспективно.

Огромное значение иммунодиагностика приобрела в связи с классификацией и прогностикой лейкозов и лимфом. В соответствии с преимущественной пролиферацией Т-, В- или нулевых лимфоцитов лимфомы и лейкозы подразделяются да Т-, В- и «нуль»-формы со своими особенностями течения и с разным прогнозом (табл. 6).

Таблица 6. Лимфомы и хронический лимфолейкоз у взрослых

Морфология Тип Относительная частота Другие характеристики Прогноз
Хронический лимфоцитар-ный лейкоз и диффузные лимфоцитарные лимфомы «дифференцированного» типа В «Нуль» Т Наиболее часто Редко Нередко Массивная спленомега-лия, поражение кожи, азурофильные гранулы, кислая фосфотаза
Фолликулярные (нодуляр-ные) лимфоцитарные лимфо-мы В «Нуль» Наиболее часто Исключительно редко Лучше, чем диф-фузная лимфома
Диффузная лимфома «плохо дифференцированного» или «лимфобластного» типа В     Т     «Нуль» Часто     Нередко   Больше Ig на поверхнос-ти, чем при «дифферен-цированном» типе. Чаще в пожилом воз-расте. Чаще у подростков и юношей, медиастиналь-ное расположение, боль-шое число клеток в крови. Чаще в пожилом возрас-те. Наилучший среди диффузных.     Мало данных     Плохой
Гистиоцитарная, «крупноклеточная» лимфома В Т «Нуль» Часто Менее часто Часто Хуже, чем фол-ликулярная или диффузная плохо дифференцированная
Лимфома типа Беркитта Синдром Цезари и грибовидный микоз В Т «Нуль»   Наиболее часто Редко

Поиск методов иммунотерапии опухолей идет в следующих направлениях.

Активная иммунизация. Основанием для этого служит тот факт, что в опухоли содержатся специфические антигены, которые можно изолировать.

Организм способен распознавать и иммунологически реагировать ранних при какой-то форме эффективной иммунизации; возникший иммунный ответ дол­жен быть эффективен, особенно если основная масса опухоли удалена хирургически, с помощью радиотерапии и т. п.

Боль­шое число попыток применения аутогенных опухолевых вак­цин с использованием живых, убитых, химически модифици­рованных клеток или их различных фракций пока не дали удовлетворительно воспроизводимых результатов.

Это на­правление может оказаться весьма эффективным, если удаст­ся изолировать вирусы, индуцирующие опухоли у человека или найти методы конъюгирования опухолевых антигенов с такой несущей молекулой, которая бы обеспечивала эффек­тивную стимуляцию иммунного ответа.

Пассивная, или адоптивная, иммунизация. Предполагается введение больному донорских сывороток или лимфоцитов, специфически реагирующих против опухолевых клеток, но не повреждающих нормальные. В экспериментах на чистолинейных животных этот метод легко воспроизводим.

В клиниче­ской практике решение проблемы затруднено антигенной гетерогенностью и индивидуальностью каждого человека.

Вот почему найти донора, от которого можно было бы получить антисыворотку и тем более лимфоциты, неактивные против нормальных антигенов опухоленосителя, практически невоз­можно.

Неспецифическая стимуляция.

Поскольку клеточные формы иммунного реагирования при многих формах опухолей угне­тены, есть основания надеяться, что неспецифическая стиму­ляция Т-лимфоцитов или фагоцитарной системы организма повысит его противоопухолевую резистентность, С этой целью используют многократные введения вакцины БЦЖ, оказывающей адъювантное действие на иммунную систему, или вакци­ны, приготовленной из Corinebacterium Parvum. Делаются попытки с помощью современной сепараторной техники вы­деления всех или почти всех циркулирующих в крови лимфо­цитов стимулировать их ФГА с последующим возвращением в кровоток больного. Разрабатываются также приемы спе­цифической стимуляции лимфоцитов различными антигенными фракциями опухоли. Начаты попытки использования тимозина и фактора переноса для лечения опухолей.

С помощью введения БЦЖ в кожу, пораженную меланомой, достигнуты определенные успехи и в ряде случаев полу­чена регрессия опухоли. Следует, однако, иметь в виду, что применение живых вакцин в больших дозах чревато разви­тием осложнений типа БЦЖ-итов. Возможны также аллергические реакции.

Кроме того, различные стимуляторы Т-лимфоцитов могут оказывать стимулирующий эффект по отношению к Т-супрессорам. Таким действием обладают, в частности, ФГА и конканавалин А.

Хирургическое вмешатель­ство необходимо и с иммунологической точки зрения – иммунным силам легче справится с малым «опухолевым грузом».

Простейшее химическое соединение, которое выделено из микобактерий туберкулеза и которое замещает их Т-стимулирующую активность, – это мурамил-дипептид. Это вещест­во стимулирует антителогенез и фагоцитарную активность, повышает резистентность животных к заражению возбудите­лями различных инфекций, обладает антипаразитарным и противоопухолевым действием.

Источник: https://studopedia.org/12-102303.html

Иммунодиагностика онкологических заболеваний. Принципы

ИММУНОДИАГНОСТИКА: Иммунодиагностика злокачественных опухолей основана на реак­ции

Иммунодиагностика — область медицины, основанная главным образом на радиоиммунном анализе. Можно измерить концентрацию антигенов и антител, присутствующих в жидкостях организма в низкой концентрации.

Иммунодиагностика в онкологии основана на высвобождении опухолью в кровоток или лимфу определенных субстанций в форме или концентрации, не свойственной здоровым людям.

Эти вещества, как правило, называют опухолевыми маркерами, иногда их относят к антигенам, несмотря на то что они не всегда вызывают иммунный ответ. Кроме того, важную роль в иммунодиагностике играют гормоны и онкофетальные белки.

Опухоль-ассоциированные антигены и онкофетальные антигены представляют большой интерес.

Специфические неоантигены у людей выявляют редко; первые сообщения об обнаружении особой антигенности в экстрактах РЯ, сделанные Levi, Barlow и Bhattacharya, нуждаются в подтверждении.

Опухоль-ассоциированные антигены идентифицированы и охарактеризованы частично в работах Gall, Walling, Pearl и DiSa-ia.

Опухоль-ассоциированные антигены способны к мимикрии под нормальные клеточные белки, что затрудняет их тщательное выделение. Поскольку современная иммунодиагностика основана на радиоиммунном анализе, для клинического анализа необходимо использовать высокоочищенные антигены.

Секретируемые продукты опухолевых клеток — лучшие диагностические маркеры. В диагностике широко используются миеломные белки, АФП, продуцируемый печеночноклеточным раком и тератокарциномой, содержащей элементы желточного мешка, а также РЭА, секретируемый опухолями ЖКТ. Прекрасным опухолевым маркером при гестационной трофобластической болезни служит хорионический гонадотропин (ХГ).

Иммунодиагностика опухоли: – а-фетопротеин (рак печени, герминогенные опухоли яичника) – Хорионический гонадотропин (злокачественные опухоли трофобласта) – Миеломные белки и белки Бенс-Джонса – Простатический специфический антиген – Раково-эмбриональный антиген

– Обнаружение опухоль-ассоциированных антигенов при других злокачественных новообразованиях

При создании МКА используют гибридомную технологию, которая привела к революции в иммунодиагностике.

В онкоиммунологии появились антитела, нацеленные на опухоль-ассоциированные антигены (дифференцировочные антигены и другие опухолевые маркеры) с ранее недоступной специфичностью.

Такие антигенные детерминанты описаны при лейкозе и лимфоме, а также при различных солидных опухолях, включая меланому, рак легкого, молочной железы, простаты и новообразования ЖКТ.

Кроме того, МКА используют в качестве иммуноадсорбентов, что позволяет выделить и охарактеризовать опухоль-ассоциированные антигены.

Несмотря на то что истинно опухолеспецифических антигенов, по-видимому, не существует, чрезвычайно высокая «разрешающая способность» МКА позволяет идентифицировать антигены, присутствующие на злокачественных, но несвойственных нормальным клеткам взрослого человека.

Эти антигенные различия можно использовать в некоторых методах диагностики, стадирования злокачественного новообразования и лечения больных. Циркулирующие антигены, как секретируемые опухолевой клеткой, так и слущившиеся с ее поверхности, можно обнаружить с помощью МКА, которые специально разработаны для серологической диагностики.

Это помогает не только установлению первичного диагноза, но и мониторингу результатов терапии.

МКА к антигенам опухоли и нормальной ткани необходимы в качестве реагентов для иммуногистохимического анализа лимфоидной инфильтрации в лимфоузлах, совершенствованию классификации лимфом и лейкозов, первичной диагностики недифференцированного рака или аденокарцином неизвестного происхождения. Эти примеры иллюстрируют, насколько важны МКА для постановки раннего диагноза и более точной классификации злокачественных новообразований.

Применение МКА, направленных на опухолевые антигены или маркеры, с целью определить стадию заболевания также считается многообещающим методом.

Радиографию после введения меченных радиоактивными изотопами МКА можно использовать для установления локализации опухоли, которую другими методами определить не удается.

С одной стороны, это снижает вероятность занижения стадии заболевания, а с другой — проведения неадекватной терапии.

Несмотря на то что остаются некоторые нерешенные проблемы, исследования на животных и предварительные данные, полученные у больных, позволяют предположить, что стадирование с помощью меченых МКА станет доступным для клинического применения уже в ближайшем будущем.

– Читать далее “Модификаторы биологических реакций: цитокины”

Оглавление темы “Иммунология опухолей”:

Источник: https://medicalplanet.su/oncology/immunodiagnostika_onkologicheskix_zabolevanii.html

Иммунодиагностика опухолей – Гематология и онкология – Справочник MSD Профессиональная версия

ИММУНОДИАГНОСТИКА: Иммунодиагностика злокачественных опухолей основана на реак­ции

Опухоль-ассоциированные антигены (ОАА) могут помочь диагностировать различные опухоли и иногда установить ответ на терапию или рецидив.

Идеальный опухолевый маркер можно выделить только из опухолевой ткани, он будет специфичен только для этого типа опухоли, его можно определить при небольшой общей опухолевой массе, он будет иметь непосредственную взаимосвязь с опухолевой массой и будет обнаруживаться у всех пациентов с данной опухолью. Однако, хотя большинство опухолей выделяет в системный кровоток макромолекулы антигенов, которые можно обнаружить, ни один из опухолевых маркеров не обладает всеми требуемыми характеристиками, которые позволили бы проводить специфичные или чувствительные тесты при ранней диагностике или массовых программах скрининга на предмет онкологических заболеваний.

Раковый эмбриональный антиген (РЭА) представляет собой белково-полисахаридный комплекс, который обнаруживается при раке толстой кишки и в норме в кишечнике плода, поджелудочной железе и печени.

в крови повышено у больных раком толстой кишки, но специфичность относительно низкая, поскольку положительный результат также получают у заядлых курильщиков и у пациентов с циррозом, язвенным колитом и другими формами рака (например, раком молочной железы, поджелудочной железы, мочевого пузыря, яичников и шейки матки).

Мониторинг уровня РЭА может быть полезен при оценке степени рецидива после иссечения опухоли, если изначально у пациента уровень РЭА был повышен, а также для уточнения прогноза в зависимости от стадии.

Альфа-фетопротеин в норме образуется в гепатоцитах плода; он также присутствует в сыворотке пациентов с первичной гепатоцеллюлярной карциномой, несеминомными герминогенными опухолями и часто – с эмбриональными карциномами яичников или семенников. Определение уровня часто полезно для оценки прогноза и, реже, для диагностики.

Бета-субъединица человеческого хорионического гонадотропина (бета-ХГЧ), которую определяют с помощью иммунологического анализа, представляет собой основной клинический маркер у женщин с гестационными трофобластическими опухолями (ГТО) – рядом заболеваний, включающих пузырный занос, неметастатические ГТО и метастатические ГТО – и примерно у двух третей мужчин с эмбриональной карциномой семенников или хорионкарциномой. Бета субъединицу измеряют, поскольку она является специфичной для ХГЧ. Этот маркер присутствует в небольших количествах у здоровых людей. Его уровень повышается в период беременности.

Простат-специфический антиген (ПСА), гликопротеин, обнаруживаемый в проницаемых эпителиальных клетках предстательной железы, определяется в низких концентрациях в сыворотке крови здоровых мужчин.

С использованием адекватного верхнего предела нормы анализ с использованием моноклональных антител выявляет повышенный уровень ПСА в сыворотке крови примерно у 90% пациентов с распространенным раком предстательной железы, даже в отсутствие определяемой метастатической болезни.

Этот анализ чувствительнее, чем анализ с простатической кислой фосфатазой.

Однако, поскольку уровень ПСА повышается и при других состояниях (например, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, простатит, недавнее инструментальное вмешательство на мочеполовой системе), он менее специфичен. ПСА можно использовать для мониторинга рецидивов после диагностики и лечения рака предстательной железы.

СА 125 полезен в клинической практике для скрининга, диагностики и мониторинга терапии рака яичников, хотя при любом перитонеальном воспалительном процессе и некоторых других видах рака уровень его может повышаться.

Бета-2-микроглобулин часто повышается при множественной миеломе и при некоторых лимфомах. В основном используется для оценки прогноза.

CA 19-9 изначально был разработан для выявления рака толстой кишки, но оказался более чувствителен для определениярака поджелудочной железы.

Он в основном используется при принятии решения относительно выбора терапии у пациентов с распространенным раком поджелудочной железы.

CA 19-9 также может повышаться при других опухолях ЖКТ, особенно при раке желчных протоков, а также при некоторых доброкачественных новообразованиях желчных протоков и холестатических нарушениях.

CA 15-3 и CA 27-29 повышаются у большинства пациентов с метастатическим раком молочной железы. Их уровень также может повышаться и при других состояниях. Эти маркеры в основном используют для мониторинга ответа на терапию.

Хромогранин А используется как маркер карциноида и других нейроэндокринных опухолей. Чувствительность и специфичность для нейроэндокринных опухолей может превышать 75%, и диагностическая точность выше для диффузных, чем для локализованных опухолей.

Уровень этих маркеров может повышаться при других видах рака, таких как рак легких и предстательной железы, а также при некоторых доброкачественных нарушениях (например, при первичной гипертензии, хронических заболеваниях почек, хроническом атрофическом гастрите).

Тироглобулин образуется в щитовидной железе, его уровень может повышаться при различных нарушениях ее функции. Он в основном используется как маркер после тиреоидэктомии для выявления рецидива рака щитовидной железы и для мониторинга ответа на терапию метастатического рака щитовидной железы.

TA-90 является высокоиммуногенной субъединицейопухолеспецифического антигена в моче, который присутствует в 70% случаевмеланом, сарком мягких тканей и карцином молочной железы, толстой кишки илегких. В некоторых исследованиях показано, что уровень ТА-90 можно использовать для достаточно точного прогноза выживаемости и выявления субклинической болезни после хирургического удаления меланомы.

Источник: https://www.msdmanuals.com/ru/%D0%BF%D1%80%D0%BE%D1%84%D0%B5%D1%81%D1%81%D0%B8%D0%BE%D0%BD%D0%B0%D0%BB%D1%8C%D0%BD%D1%8B%D0%B9/%D0%B3%D0%B5%D0%BC%D0%B0%D1%82%D0%BE%D0%BB%D0%BE%D0%B3%D0%B8%D1%8F-%D0%B8-%D0%BE%D0%BD%D0%BA%D0%BE%D0%BB%D0%BE%D0%B3%D0%B8%D1%8F/%D0%B8%D0%BC%D0%BC%D1%83%D0%BD%D0%BE%D0%BB%D0%BE%D0%B3%D0%B8%D1%8F-%D0%BE%D0%BF%D1%83%D1%85%D0%BE%D0%BB%D0%B5%D0%B9/%D0%B8%D0%BC%D0%BC%D1%83%D0%BD%D0%BE%D0%B4%D0%B8%D0%B0%D0%B3%D0%BD%D0%BE%D1%81%D1%82%D0%B8%D0%BA%D0%B0-%D0%BE%D0%BF%D1%83%D1%85%D0%BE%D0%BB%D0%B5%D0%B9

Способ диагностики злокачественных опухолей с использованием специфической антисыворотки к универсальному опухолевому антигену

ИММУНОДИАГНОСТИКА: Иммунодиагностика злокачественных опухолей основана на реак­ции

Способ может быть использован в медицине, а именно в онкологии. У генетически однородных животных выделяют эмбрион в стадии fetus. Готовят клеточную взвесь.

После иммунизации у животного производят забор клеток селезенки, выделяют лимфоциты и проводят 2-й этап иммунизации животного той же генетической линии взвесью этих лимфоцитов.

После чего получают антисыворотку, добавляют в нее клетки интактных органов тех же животных, смесь декантируют. Надосадочную жидкость фильтруют через миллипоровый фильтр с диаметром пор 20 мкм.

Фильтрат добавляют к крови обследуемого, а результат учитывают по иммунофлуоресценции и СОЭ и при величинах, достоверно отличающихся от контрольных значений, диагностируют опухоль. Способ обеспечивает повышение чувствительности и специфичности диагностики. 1 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к медицине, более точно к онкологии, и может быть использовано в диагностике злокачественных опухолей.

Известные аналогичные способы диагностики опухолей имеют недостаточно высокую чувствительность и даже у наиболее эффективных из них она не превышает 40-60%. Такая низкая чувствительность известных онкологических иммунодиагностических тестов объясняется тем, что используемые в этих реакциях онкомаркеры, строго говоря, таковыми не являются и представляют собой органоспецифические или онкофетальные антигены, присущие в норме отдельным организмам или системам органов. Это приводит к тому, что ожидаемое универсальное иммунологическое выражение особенностей единого механизма опухолеобразования подменяется частным, присущим не опухолевым состояниям (воспаление, коллагенозы). Известно, что органоспецифические антигены не являются обязательными для опухолевой трансформации клеток, что и дает такой высокий процент ложноположительных результатов при диагностике злокачественных опухолей. Краткий обзор иммунодиагностики в онкологии показывает следующее. В 1949 г. Л.А.Зильбер впервые показал, а в 1957 г.Т.Прэн и Дж.Мэйн подтвердили, что клеткам злокачественных опухолей присущи собственные антигены. Принято выделять 4 группы антигенов (по Абелеву). 1) антигены вирусных опухолей (идентичны для любых вирусных опухолей этого вида); 2) антигены канцерогенных опухолей (строго индивидуальны как для больных, так и для опухоли); 3) изоантигены трансплантационного типа или ТСТА – опухолеспецифические трансплантационные антигены различны во всех индивидуальных опухолях, индуцированных химическими антигенами и тождественны в разных опухолях, вызванных одним вирусом; 4) эмбриональные антигены. В процессе канцерогенеза клетки подвергаются дедиференцировке, приобретая эмбриональный тип строения. В них часто обнаруживают эмбриональные антигены, специфичные для эмбриональных стадий развития организма. Эти антигены способны иммунизировать организм против опухоли. Наиболее изучены антигены: – фетопротеин и раковоэмбриональный антиген (РЭА). I-й обнаруживают при первичной карциномии печени, II – при аденокарциноме кишечника, желудка, пищевода или поджелудочной железы. У детей с нейробластомой, лимфосаркомой или опухолями мозга обнаруживается 2-фетопротеин, при раке желудка- фетальный сульфогликопротеин. Эти антигены локализованы в клеточных мембранах или циркулируют в крови. Существует специфическая группа антигенов, так называемые гетероспецифические антигены. Их нельзя отнести к чужеродным для данного организма, так как помимо опухоли они присутствуют в других нормальных тканях. К числу их относится почечный антиген, который присутствует в норме в почке и в опухоли печени-гепатоме. Аденокарцинома почки содержит антиген легких и печени. Иммунодиагностика злокачественных опухолей основана на индикации в крови больных вышеперечисленных антигенов, антител к ним и выявлении сенсибилизированных к опухолевым антигенам лимфоцитов. На обнаружении – фетопротеина основаны методы диагностики лимфосаркомы, нейробластомы (см. На обнаружении антител к РЭА -способ по патенту РФ N2077725, кл.С 01 N 33/53, к вирусу лейкоза – способ по авторскому свидетельству N 1641443, G 01 N 33/53). На обнаружении гетерогенных антигенов патент РФ N2063768, 1991 г., А 61 K 39/00, патент РФ N 2025734, МПК G 01 N 33/53, авт.свид. СССР N1589215, G 01 N 33/53, авт. свид. N 1704087, G 01 N 33/53, авт.свид.N 170922, авт.свид. N 1589215. В авт. свид. N1805392 (G 01 N 33/53) описан способ диагностики рака по антигенам (HLA-B35) лимфоцитов. Однако существующий уровень диагностики таков, что, по сути дела, ни один из тестов не является универсальным. Обнаружение в крови антител является наименее достоверным тестом, т.к. у человека в крови существует очень широкий спектр противоопухолевых и тканевых антител. Не существует методов по выявлению специфического универсального антигена опухолей. В этом плане перспективно выявление сенсибилизированных лимфоцитов, которые ингибируют рост колоний опухолевых клеток. Однако они активны только против “своего” вида опухоли. Таким образом, используемые методы иммунодиагностики опухолей слабо удовлетворяют требованиям первичной диагностики опухолей, совершенно неудовлетворительны в целях скрининга злокачественных новообразований и групп повышенного риска и могут быть применены с известными ограничениями лишь в иммуномониторинге лечения злокачественных опухолей. Предлагаемый метод обнаружения онкомаркера принципиально отличается от ныне используемых тем, что определяет универсальный, высоко специфический антигенный маркер опухолевого роста, сохраняющийся на всех этапах опухолевой прогрессии. Метод основан на результатах общетеоретических и экспериментальных работ автора, в которых установлено, что в любых, гистологически различных клетках злокачественных опухолей функционирует устойчивый в опухолевой прогрессии процесс Т-клеточного иммунологического распознавания поверхностных эмбриоспецифических антигенов и что указанный механизм лежит в основе феноменов опухолеобразования (иммортализация и прогрессия). Прототипом заявленного способа выбран способ по патенту РФ N2063768, 1991, МПК А 61 К 39/00, который включает извлечение тканей опухоли у умерших лиц, замораживание ее, диспергирование, декантирование клеток, экстрация антигена из надосадочной жидкости, иммунизация животных экстрактом, получение антисыворотки, постановка иммунологической реакции иммунодиффузии, по результатам которой выносят суждение о наличии или отсутствии опухоли, т.е. проводят диагностику. Заявленный способ в отличие от известного позволяет получить антисыворотку к идиотопу Т-клеточного рецептора, функционирующего в клетках злокачественных опухолей, то есть антиидиотипической антиэмбриональной сыворотки, что обеспечивает диагностику всех видов опухолей независимо от их генеза и расположения. Для осуществления способа необходимо выделить эмбрион в стадии Fetus у генетически однородных животных, диспергировать его. Клеточной взвесью провести иммунизацию животного той же генетической линии. Затем необходимо у иммунизированного животного извлечь клетки селезенки, выделить из них лимфоциты в градиенте плотности фиколл-верографина (1,065-1,079). Этими лимфоцитами следует провести многократную иммунизацию сингенных интактных животных и получить у них стандартным образом антисыворотку. Эту антисыворотку следует профильтровать через миллипоровые фильтры с диаметром пор 20 мкм и ввести фильтрат в иммунологическую реакцию с тканями обследуемого, а затем по реакции иммунофлуоресценции или СОЭ диагностировать опухоль. В качестве тканей могут быть использованы ткани опухолей в реакции иммунофлуоресценции или кровь больного в реакции СОЭ. Диагноз опухоли устанавливают при статистически достоверных различиях результатов реакций между опытной и контрольной пробами. При этом в случае проведения реакции СОЭ для вычисления различий между опытной и контрольной пробами используют следующую расчетную формулу где – – диагностический коэффициент, который при наличии опухоли составляет 1,5 A – величина СОЭ в опытной пробе (к цитратной крови обследуемого добавлена антисыворотка к антигену опухоли) B1 и В2 – величина СОЭ в контрольных пробах (к цитратной крови обследуемого добавлена антисыворотка того же вида животного, который использовался для получения антисыворотки) X – наибольшее значение СОЭ в анализе (или в пробе А или среднее B1 и B2, т. е.(B1 + B2)/2]. Пример осуществления способа. У крыс линии Wistar весом 300-500 г извлечен эмбрион в стадии Fetus. Ткани его диспергированы в воде в соотношении объемов ткань: вода 1:5. Полученной взвесью осуществлялась еженедельная иммунизация интактных крыс линии Wistar. Через 1,5 месяца у забитых крыс извлечена селезенка, диспергирована и в градиенте фиколл- верографина 1,077 получены Т лимфоциты. Из них приготовили взвесь 1:1, которую вводили еженедельно другим интактным крысам. После 5 иммунизаций крысы забиты, у них взята кровь, “осветлена”, получена из нее сыворотка, профильтрована, с указанной сывороткой поставлена реакция СОЭ у нижеприведенных групп больных. При постановке реакции СОЭ использовали стандартный капилляр с внутренним диаметром 0,8 мм. К 200 мкл 5% забуференного раствора цитрата натрия добавляют 800 мкл цельной свежей венозной крови, взятой в момент проведения анализа, не позже, чем через 20 сек после забора. От момента смешивания крови с консервантом до проведения анализа не должно пройти более 1 часа. При наличии гемолиза или свертывания анализ ставить нельзя. Из этой крови берут 3 порции по 70 мкл каждая в 3 отдельные пробирки. В одну из них добавляют рабочую (с антителами) в 2 другие -контрольные (без антител) сыворотки по 20 мкл каждая. Сыворотки вводят непосредственно в кровь с консервантом, а не на стенки. Капилляры должны быть одного размера. Смеси перемешивают и заполняют ими капилляры до отметки 5/0. Выдерживают 1 час. Через 1 час снимают показатели и обсчитывают их по вышеприведенной математической формуле. Указанным способом была получена на крысах линии Wistar антисыворотка, которая использовалась в диагностике заболеваний у конкретных больных. В анализе с кровью больной К-овой, 1942 г. рождения, d-s: рак прямой кишки получены следующие результаты: A=25, B1=28, B2=28
По математической формуле найден коэффициент :
1/7 > 1,5, т.е. диагноз злокачественная опухоль подтверждается В анализ крови больного с фибромой мочки уха получены следующие результаты: D-s: рак прямой кишки получены следующие результаты:

A=10, B1=12, B2=12

По математической формуле найден коэффициент :

< 1/5, т.е. диагноз незлокачественная опухоль подтверждается,
Ниже даны результаты исследований на группе больных злокачественными опухолями. Рак молочной железы – 125 больных, чувствительность – 83,2%; Рак легкого – 247 больных, чувствительность – 98,1%; Рак желудка – 156 больных, чувствительность – 85,2%; Рак ободочной кишки – 23 больных, чувствительность – 82,5%; Рак прямой кишки – 27 больных, чувствительность – 92,5%; Рак щитовидной железы – 58 больных, чувствительность – 79,5%; Рак почки – 38 больных, чувствительность – 78,6%; Рак тела матки – 412 больных, чувствительность – 75,08%; Рак шейки матки – 41 больной, чувствительность – 81,8%, Контрольная группа – Практически здоровые – 400 человек, чувствительность – 5,1%; Кистозно-фиброзная мастопатия – 221 человек, чувствительность – 8,3%; Гастрит – 120 человек, чувствительность – 6,2%; Язвенная болезнь желудка – 62 человека, чувствительность – 8,3%; Коллагенозы – 40 человек, чувствительность – 6,5%; Воспаление легких – 60 человек, чувствительность – 7,2%; (остр. и хрон.) Простатиты – 18 человек, чувствительность – 2,1%;

Хронические колиты – 115 человек, чувствительность – 4,2%.

Заключение: предлагаемый метод имеет чувствительность – 85,9% и специфичность – 92,4%, то есть является высокоэффективным диагностическим тестом. Для диагностики опухоли в реакции иммунофлуоресценции использовали общие приемы присущие этим методам и широко известные в биологии (см. например. Добровольцев Г. Е. “Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов” М.,1989 г.)

Формула изобретения

1. Способ диагностики злокачественных опухолей с использованием специфической антисыворотки к универсальному опухолевому антигену, включающий выделение тканей, приготовление клеточной взвеси, иммунизацию животных, забор крови иммунизированных животных, получение из нее антисыворотки, введение ее в реакцию с кровью обследуемого, по результатам которой диагностируют опухоль, отличающийся тем, что проводят 2-этапную иммунизацию, в качестве тканей на 1-м этапе у генетически однородных животных выделяют эмбрион на стадии fetus, готовят клеточную взвесь, после иммунизации которой у животного производят забор клеток селезенки, выделяют из них лимфоциты и проводят 2-й этап иммунизации животного той же генетической линии взвесью этих лимфоцитов, после чего у животного получают антисыворотку, добавляют в нее клетки интактных органов тех же животных, смесь декантируют, отделяют надосадочную фракцию, фильтруют ее через миллипоровый фильтр с диаметром пор 20 мкм, фильтрат добавляют к крови обследуемого, а результат учитывают по иммунофлуоресценции или в реакции СОЭ и при величинах, достоверно отличающихся от контрольных значений, диагностируют опухоль. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что реакции СОЭ рассчитывают по математической формуле

где – диагностический коэффициент, который при наличии опухоли составляет 1,5; A – величина СОЭ в опытной пробе (к цитратной крови обследуемого добавлена антисыворотка к антигену опухоли);

B1 и B2 – величина СОЭ в контрольных пробах (к цитратной крови обследуемого добавлена антисыворотка того же вида животного, который использовался для получения антисыворотки);

X – наибольшее значение СОЭ в анализе (или в пробе A, или среднее B1 и B2, т.е. (B1 + B2) / 2).

NF4A Восстановление действия патента Российской Федерации на изобретение

Извещение опубликовано: 10.02.2005        БИ: 04/2005

Источник: https://findpatent.ru/patent/213/2137136.html

Иммунодиагностика опухолей

ИММУНОДИАГНОСТИКА: Иммунодиагностика злокачественных опухолей основана на реак­ции
Иммунодиагностика опухолей

Опухоль-ассоциированные антигены (ТАА) могут помочь в диагностике различных опухолей и иногда определяют ответ на терапию или возврат болезни.

Идеальным опухолевым маркером являлся бы маркер, выделяемый только из опухолевой ткани, специфичный для данного типа опухоли, определяемый при малом количестве опухолевых клеток, имеющий непосредственное отношение к массе опухолевых клеток и презентирующий у всех больных с данной опухолью.

Однако, хотя большинство опухолей высвобождают антигенные макромолекулы в циркуляцию, ни один из опухолевых маркеров не имеет всех необходимых характеристик, обеспечивающих достаточную специфичность или чувствительность для использования в ранней диагностике или в программах массового скрининга рака.

Раковый эмбриональный антиген (РЭА) является протеин-полисахаридным комплексом, выявляемым при раке толстой кишки и в нормальном фетальном кишечнике, поджелудочной железе и печени.

Уровень этого антигена в крови повышен у больных раком толстой кишки, но специфичность его относительная, так как позитивные результаты встречаются у много курящих людей, у больных циррозом, при язвенном колите и других онкологических заболеваниях (например, рак молочной железы, поджелудочной железы, мочевого пузыря, яичников, шейки матки).

Мониторинг уровня РЭА может быть полезным для определения возврата болезни после хирургического удаления опухоли у больных, имевших изначально повышенный уровень РЭА.

а-Фетопротеин является нормальным продуктом фетальных клеток печени, также выявляется в сыворотке крови у больных первичной гепатомой, неоплазмами желточного мешка и часто эмбриональными раком яичников и яичек.

-Субъединица человеческого хори-онного гонадотропина ( -HCG) определяется иммунологическими методами исследования и является основным клиническим маркером у женщин при трофобластических опухолях (ТО) — группе заболеваний, включающих пузырный занос, неметастатические ТО и метасти-ческие ТО  и у2/ мужчин с тестикулярным эмбриональным раком или хориокарциномой. Определение -субъединицы имеет важное значение, так как является специфичным показателем для ГТН.

Простат-специфический антиген (PSA) — гликопротеин, локализующийся в эпителиальных клетках протоков предстательной железы, может быть определен в низкой концентрации у здоровых мужчин.

В исследованиях с использованием моноклональных антител примерно у 90 % больных с прогрессирующим раком предстательной железы определяется повышение уровня PSA, даже в отсутствие данных о метастазировании опухоли. Тест является более чувствительным, чем определение простатической кислой фосфатазы.

Но так как уровень PSA повышен и при доброкачественной гипертрофии предстательной железы, специфичность данного исследования небольшая. Определение PSA можно использовать для мониторинга рецидива заболевания после лечения рака предстательной железы.

СА 5 используется при диагностике и мониторинге терапии рака яичников, хотя любой перитонеальный воспалительный процесс может повысить его уровень.

2-Микроглобулин часто повышен при множественной миеломе и некоторых лимфомах. Используется для прогноза заболевания.

СА 19-9 изначально использовали для выявления колоректального рака, но затем было показано, что он имеет большую чувствительность для рака поджелудочной железы.

В первую очередь используется для оценки ответа на лечение у больных с распространенным раком поджелудочной железы.

Уровень СА 19—9 может быть повышен также при других видах онкологических заболеваний ЖКТ, особенно раке желчных протоков.

СА 15-3 повышен у 54—80 % больных метастическим раком молочной железы. Кроме того, его уровень может быть повышен при различныхдоброкачественных (хронические гепатиты, циррозы, туберкулез, саркоидоз, СКВ) и злокачественных (рак легкого, яичников, эндометрия, ЖКТ, мочевого пузыря) заболеваниях. Этот маркер в первую очередь используется для мониторинга ответа на терапию.

Хромогранин А используется в качестве маркера карциноидных и других ней-роэндокринных опухолей. Аномальный уровень обнаруживается у1/ больных локализованными формами заболевания и у 2/3 метастатическим раком. Уровень может быть повышен при других злокачественных заболеваниях, таких как рак легкого и предстательной железы.

Тироглобулин продуцируется щитовидной железой и может быть повышен при различных тиреоидных заболеваниях. В первую очередь применяется при раке щитовидной железы после полной тиреоидэктомии с целью определения рецидива заболевания и для мониторинга ответа на лечение при метастатической форме раке.

ТА-90 является высокоиммуногенной субъединицей мочевого опухоль-ассоци-ированного антигена, который присутствует у 70 % больных меланомой, мяг-котканными саркомами и раком молочной железы, толстой кишки и легкого.

В некоторых исследованиях показано, что уровень ТА-90 можно использовать для достаточно точного прогноза выживаемости и наличия субклинической болезни после хирургического удаления меланомы.

Мы еще коснемся темы иммунодиагностика опухолей в следующих статьях.

Источник: https://otvetkak.ru/tips/medicina-tips/immunodiagnostika-opuxolej.html

Medic-studio
Добавить комментарий