Ингибитор активатора плазминогена 1 типа: Ингибитор активатора плазминогена 1 типа (ИАП-1) — гликопротеин с

Ингибитор активатора плазминогена (SERPINE1). Выявление мутации 5G(-675)4G (регуляторная область гена): исследования в лаборатории KDLmed

Ингибитор активатора плазминогена 1 типа: Ингибитор активатора плазминогена 1 типа (ИАП-1) — гликопротеин с

Маркер связан с изменением эффективности активации плазминогена, подавлением процесса фибринолиза. Исследуется для выявления генетической предрасположенности к инфаркту миокарда, ишемической болезни сердца, преэклампсии, атеросклерозу, инсулинорезистентности и ожирению. Имеет прогностическую значимость при менингококковой инфекции.

Название гена – SERPINE1

OMIM *173360

Локализация гена на хромосоме – 7q22.1

Функция гена

Ген SERPINE1 кодирует белок – эндотелиальный ингибитор активатора плазминогена – 1 (ИАП-1), принадлежащий семейству серпинов. Белок ИАП-1 ингибирует, т. е.

замедляет работу тканевого активатора плазминогена и урокиназы, которые в свою очередь активируют переход плазминогена в плазмин, расщепляющий фибрин тромбов.

Таким образом, SERPINE1 негативно воздействует на фибринолиз и препятствует растворению тромбов, что повышает риск сосудистых осложнений, различных тромбоэмболий.

Генетический маркер 5G(-675)4G

Полиморфизм гена SERPINE1 проявляется в изменении количества повторов гуанина (G) в промоторной (регуляторной) области гена. Существует два варианта гена с разным количеством повторов гуанина в позиции -675:

  • 5G обозначает наличие последовательности из пяти оснований гуанина;
  • 4G обозначает наличие последовательности из четырех оснований гуанина – это неблагоприятный вариант, приводящий к ослаблению фибринолитической активности крови.

Возможные генотипы

Поскольку в каждой клетке человека присутствует по два экземпляра каждого гена (один наследуется от матери, второй от отца), существует три варианта генотипа по гену SERPINE1:

Частота встречаемости в популяции

Частота встречаемости 4G-аллеля в европейской популяции составляет 53-61 %.

Ассоциация маркера с заболеваниями

  • Тромбоз
  • Инфаркт миокарда
  • Ишемическая болезнь сердца
  • Преэклампсия
  • Атеросклероз
  • Инсулинорезистентность
  • Ожирение
  • Тромбоэмболические осложнения беременности
  • Менингококковая инфекция
  • Остеопороз

Описание

Регуляцию нормального кровотока у человека выполняет фибринолитическая система. Главным ферментом, ответственным за расщепление фибрина до растворимых фрагментов небольших размеров, является плазмин.

Он образуется из плазминогена под действием активаторов плазминогена тканевого и урокиназного типов, которые синтезируются эндотелиальными клетками.

Образование плазмина начинается тогда, когда синтезируемый в печени плазминоген и его активаторы присоединяются к фибрину.

Оба активатора плазминогена находятся в токе крови в комплексе с ингибиторами, наибольшее значение имеет ингибитор активатора плазминогена – 1 (ИАП-1).

Он продуцируется эндотелиальными клетками, клетками гладких мышц, мегакариоцитами и накапливается в тромбоцитах, которые на месте повреждения сосуда активируются и выделяют избыточное количество ИАП-1, предотвращая этим преждевременный лизис фибрина. ИАП-1 возрастает при многих патологических состояниях.

Его выработку стимулируют тромбин, трансформирующий фактор роста бета, тромбоцитарный фактор роста, интерлейкин-1, фактор некроза опухоли альфа, инсулиноподобный фактор роста, глюкокортикоиды и эндотоксины. Активированный протеин C ингибирует выделенный из эндотелиальных клеток ИАП-1 и тем самым стимулирует лизис сгустка.

Повышение активности ИАП-1 может быть также вызвано полиморфизмом кодирующего его гена SERPINE1.

Полиморфизм гена SERPINE1 проявляется в изменении количества повторов гуанина в промоторной (регуляторной) области гена. Существует два варианта гена с разным количеством повторов гуанина (G) в позиции -675: 5G и 4G.

5G обозначает наличие последовательности из пяти оснований гуанина; 4G обозначает наличие последовательности из четырех оснований гуанина – неблагоприятный вариант, приводящий к ослаблению фибринолитической активности крови за счет повышения концентрации в плазме ИАП-1. Это происходит из-за изменения процессов, регулирующих работу гена SERPINE1.

 При наличии в промоторной (регуляторной) области пяти повторов гуанина с ней могут связываться как активаторы, так и супрессоры транскрипции. Поэтому регуляция такого гена происходит правильно. При наличии четырех повторов гуанина связывание супрессора нарушено, следовательно, негативной регуляции не происходит и базальная активность синтеза белка повышена.

У гомозигот по аллелю 4G (генотип 4G/4G) повышение концентрации белка ИАП-1 в плазме крови приводит к повышению риска тромбообразования, а при беременности – к увеличению риска невынашивания и к такому осложнению, как преэклампсия – она связана с тромбозом межворсинчатых или спиральных артерий плаценты.

Своевременное выявление данного аллеля позволит подобрать адекватную профилактику и избежать осложнений.

Присутствие аллеля 4G у детей с менингококковой инфекцией негативно сказывается на процессе лечения. У пациентов с генотипом 4G/4G отмечается более высокая концентрация ИАП-1 по сравнению с детьми с генотипами 4G/5G или 5G/5G. Нарушение фибринолиза (его торможение) является важным фактором в патофизиологии менингококкового сепсиса.

С другой стороны, присутствие аллеля 5G связано с меньшим торможением активатора плазминогена и, как следствие, с повышением активации тканевых металлопротеиназ (внеклеточных протеиназ).

Именно они, по мнению некоторых исследователей, запуская механизмы хронического воспаления в стенке аорты, приводят к потере ее структурной целостности и образованию аневризмы.

Таким образом, пациенты с вариантом гена 5G более подвержены риску развития аневризмы брюшной аорты, при этом аллель 4G играет защитную роль.

Интерпретация результатов

  • 5G/5G – нормальный уровень ИАП-1 в плазме крови;
  • 5G/4G – промежуточный уровень ИАП-1 в плазме крови;
  • 4G/4G – повышенный уровень ИАП-1 в плазме крови.

Результаты исследования должны интерпретироваться врачом в комплексе с другими генетическими, анамнестическими, клиническими и лабораторными данными.

Исследование рекомендуется проводить в комплексе:

[42-010] Генетический риск развития тромбофилии (расширенный)

Важные замечания

Для данного маркера не существует понятия «норма» и «патология», т. к. исследуется полиморфизм гена.

Источник: https://kdlmed.ru/doctors/analyzes/ingibitor-aktivatora-plazminogena-serpine1/

Ингибитор активатора плазминогена (SERPINE1). Выявление мутации 5G(-675)4G (регуляторная область гена)

Ингибитор активатора плазминогена 1 типа: Ингибитор активатора плазминогена 1 типа (ИАП-1) — гликопротеин с

Ингибитор активатора плазминогена (SERPINE1). Выявление мутации 5G(-675)4G (регуляторная область гена)

Название гена – SERPINE1 (синоним PAI-1).

OMIM *173360

Локализация гена на хромосоме – 7q22.1

Функция гена

Ген SERPINE1 кодирует белок – эндотелиальный ингибитор активатора плазминогена – 1 (ИАП-1), принадлежащий семейству серпинов. Белок ИАП-1 ингибирует, т. е.

замедляет работу тканевого активатора плазминогена и урокиназы, которые в свою очередь активируют переход плазминогена в плазмин, расщепляющий фибрин тромбов.

Таким образом, SERPINE1 негативно воздействует на фибринолиз и препятствует растворению тромбов, что повышает риск сосудистых осложнений, различных тромбоэмболий.

Генетический маркер 5G(-675)4G

Полиморфизм гена SERPINE1 проявляется в изменении количества повторов гуанина (G) в промоторной (регуляторной) области гена. Существует два варианта гена с разным количеством повторов гуанина в позиции -675:

  • 5G обозначает наличие последовательности из пяти оснований гуанина;
  • 4G обозначает наличие последовательности из четырех оснований гуанина – это неблагоприятный вариант, приводящий к ослаблению фибринолитической активности крови.

Возможные генотипы

Поскольку в каждой клетке человека присутствует по два экземпляра каждого гена (один наследуется от матери, второй от отца), существует три варианта генотипа по гену SERPINE1:

Встречаемость в популяции

Встречаемость 4G-аллеля в европейской популяции составляет 53-61 %.

Ассоциация маркера с заболеваниями

  • Тромбоз
  • Инфаркт миокарда
  • Ишемическая болезнь сердца
  • Преэклампсия
  • Атеросклероз
  • Инсулинорезистентность
  • Ожирение
  • Тромбоэмболические осложнения беременности
  • Менингококковая инфекция
  • Остеопороз

Общая информация об исследовании

Регуляцию нормального кровотока у человека выполняет фибринолитическая система. Главным ферментом, ответственным за расщепление фибрина до растворимых фрагментов небольших размеров, является плазмин.

Он образуется из плазминогена под действием активаторов плазминогена тканевого и урокиназного типов, которые синтезируются эндотелиальными клетками.

Образование плазмина начинается тогда, когда синтезируемый в печени плазминоген и его активаторы присоединяются к фибрину.

Оба активатора плазминогена находятся в токе крови в комплексе с ингибиторами, наибольшее значение имеет ингибитор активатора плазминогена – 1 (ИАП-1).

Он продуцируется эндотелиальными клетками, клетками гладких мышц, мегакариоцитами и накапливается в тромбоцитах, которые на месте повреждения сосуда активируются и выделяют избыточное количество ИАП-1, предотвращая этим преждевременный лизис фибрина. ИАП-1 возрастает при многих патологических состояниях.

Его выработку стимулируют тромбин, трансформирующий фактор роста бета, тромбоцитарный фактор роста, интерлейкин-1, фактор некроза опухоли альфа, инсулиноподобный фактор роста, глюкокортикоиды и эндотоксины. Активированный протеин C ингибирует выделенный из эндотелиальных клеток ИАП-1 и тем самым стимулирует лизис сгустка.

Повышение активности ИАП-1 может быть также вызвано полиморфизмом кодирующего его гена SERPINE1.

Полиморфизм гена SERPINE1 проявляется в изменении количества повторов гуанина в промоторной (регуляторной) области гена. Существует два варианта гена с разным количеством повторов гуанина (G) в позиции -675: 5G и 4G.

5G обозначает наличие последовательности из пяти оснований гуанина; 4G обозначает наличие последовательности из четырех оснований гуанина – неблагоприятный вариант, приводящий к ослаблению фибринолитической активности крови за счет повышения концентрации в плазме ИАП-1. Это происходит из-за изменения процессов, регулирующих работу гена SERPINE1.

 При наличии в промоторной (регуляторной) области пяти повторов гуанина с ней могут связываться как активаторы, так и супрессоры транскрипции. Поэтому регуляция такого гена происходит правильно. При наличии четырех повторов гуанина связывание супрессора нарушено, следовательно, негативной регуляции не происходит и базальная активность синтеза белка повышена.

У гомозигот по аллелю 4G (генотип 4G/4G) повышение концентрации белка ИАП-1 в плазме крови приводит к повышению риска тромбообразования, а при беременности – к увеличению риска невынашивания и к такому осложнению, как преэклампсия – она связана с тромбозом межворсинчатых или спиральных артерий плаценты.

Своевременное выявление данного аллеля позволит подобрать адекватную профилактику и избежать осложнений.

Присутствие аллеля 4G у детей с менингококковой инфекцией негативно сказывается на процессе лечения. У пациентов с генотипом 4G/4G отмечается более высокая концентрация ИАП-1 по сравнению с детьми с генотипами 4G/5G или 5G/5G. Нарушение фибринолиза (его торможение) является важным фактором в патофизиологии менингококкового сепсиса.

С другой стороны, присутствие аллеля 5G связано с меньшим торможением активатора плазминогена и, как следствие, с повышением активации тканевых металлопротеиназ (внеклеточных протеиназ).

Именно они, по мнению некоторых исследователей, запуская механизмы хронического воспаления в стенке аорты, приводят к потере ее структурной целостности и образованию аневризмы.

Таким образом, пациенты с вариантом гена 5G более подвержены риску развития аневризмы брюшной аорты, при этом аллель 4G играет защитную роль.

Источник: https://helix.ru/kb/item/1319

Способ прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности на основании определения полиморфизма гена ингибитора активатора плазминогена i типа (pai-1)

Ингибитор активатора плазминогена 1 типа: Ингибитор активатора плазминогена 1 типа (ИАП-1) — гликопротеин с
4G гена ингибитора активатора плазминогена I типа при помощи метода ПЦР, при этом вероятность развития отслойки хориона и плаценты у женщин с высоким риском самопроизвольных репродуктивных потерь при генотипе 4G/4G прогнозируют как 50,0%, при генотипе 4G/5G – как 35,3%. class=blcSndTextValline score=147.085>

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и предназначено для прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках при полиморфизме генов PAI-1.

Отслойка хориона и плаценты на ранних сроках беременности в общей популяции составляет 3%, у женщин с привычной потерей беременности может достигнуть 10-15%. Наиболее часто встречаются субхориальные отслойки в среднем в 7 недель беременности, что соответствует наиболее активной фазе инвазии цитотрофобласта в стенки спиральных артерий [3].

Наличие отслоек сопровождается наружным кровотечением в 71%, бессимптомным течением – в 29%.

Если не происходит гибель эмбриона (плода), то в дальнейшем возможно развитие плацентарной недостаточности – в 24% случаев, преждевременных родов – в 16-19%, преэкламсии – в 8%, задержки развития плода – в 7%, дистресс-синдрома у новорожденного – в 19%. Частота кесарева сечения у данного контингента беременных составляет 27% [2].

Существенное значение в процессе инвазии цитотрофобласта играет соотношение фибринолитических и антифибринолитических компонентов системы гемостаза на локальном (эндометрий) уровне. Процесс регуляции фибринолиза зависит от активности активаторов плазминогена тканевого и урокиназного типа (t-PA и u-РА) и от уровня синтеза и секреции ингибиторов активации плазминогена (PAI-1 и PAI-2). [1, 5]

PAI-1 ответственен не только за повышение депозиции фибрина в маточных сосудах и снижении маточно-плацентарного кровотока, ему принадлежит также важная роль в снижении степени инвазии трофобласта в ранние сроки беременности. Имеется также связь между ранними преэмбриотическими потерями и уровнем PAI-1, что в основном связано с дефектами имплантации [4].

При подготовке к имплантации под влиянием прогестерона в эндометрии происходит повышение содержания PAI-1, тканевого фактора и снижение уровня активаторов плазминогена тканевого и урокиназного типов (t-PA и u-РА) и других протеаз, необходимых для разрушения экстрацеллюлярного матрикса в процессе имплантации.

В условиях гипофибринолиза, в частности, связанных с полиморфизмом генов PAI-1 происходит десинхронизация локальных процессов фибринолиза и фибринообразования при имплантации. В такой ситуации протеаз, синтезируемых бластоцистой, становится недостаточно для разрушения экстрацеллюлярного матрикса и адекватного внедрения в эндометрий.

В связи с этим происходит образование ретрохориальных отслоек наиболее часто в сроки 8,3±0,4 недели [2].

Ингибитор активатора плазминогена (PAI-1) образуется в клетках эндотелия, гепатоцитах, а также в неактивной форме может высвобождаться из тромбоцитов. Концентрация PAI-1 зависит как от внешних (уровень триглицеридов [8], курение [9]), так и внутренних (генетических) факторов.

Известен полиморфизм в промоторной области гена PAI-1. Различия в фенотипических проявлениях генотипа PAI-1 обусловлены тем, что с промотором гена 5G может связываться как активатор, так и репрессор, а с промотором гена 4G – только активатор.

Поэтому ген 5G, легко включается и легко выключается, а ген 4G легко включается, но слабо выключается [6, 7].

Полиморфный вариант 4G сопровождается повышенной экспрессией гена и повышением уровня PAI-1 в крови [9]. В результате снижается активность фибринолитической системы. В крови людей, имеющих вариант 4G/4G, концентрация PAI-1 значительно выше, чем при вариантах 5G/4G и 5G/5G.

Задача изобретения – повысить эффективность прогнозирования отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности на основании определения полиморфизма гена PAI-1.

Поставленная задача решается тем, что на основании определения полиморфизма гена PAI-1 вне беременности с высокой степенью вероятности возможно прогнозирование отслойки хориона и плаценты на ранних сроках беременности и проведение лечебно-профилактических мероприятий.

Определение полиморфизма гена PAI-1 необходимого производить у женщин:

1) с метаболитическим синдромом;

2) при наличии репродуктивных потерь;

3) при наличии плацентарной недостаточности в анамнезе;

4) при наличии преэкламсии в анамнезе.

Практически способ осуществляется следующим образом:

Материалом для проведения исследования является периферическая кровь. Взятие крови для исследования осуществляется путем пункции кубитальной вены. В качестве антикоагулянта используется ЭДТА. Допустимо также использовать цитрат.

1-й Этап: Выделение ДНК

Для выделения ДНК используется комплект реагентов ПРОБА-РАПИД-ГЕНЕТИКА или ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА (000 «НПО ДНК-Технология», Россия)

Полученный препарат ДНК можно хранить до 7 суток при температуре 2-8°C, при температуре минус 20°C до одного месяца.

2-й Этап. Проведение реакции амплификации

Для проведения амплификации используется комплект реагентов для определения генетических полиморфизмов, ассоциированных с нарушениями функций сердечно-сосудистой системы «КардиоГенетика» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).

1. Внести в промаркированные пробирки по 20 мкл соответствующей смеси для амплификации.

2. Приготовить в отдельной пробирке смесь ПЦР-буфера и Taq-AT полимеразы. Добавить в каждую пробирку со смесью для амплификации по 10 мкл смеси ПЦР-буфера и Taq-AT полимеразы.

3. Добавить в каждую пробирку по одной капле (20 мкл) минерального масла.

4. Добавить в соответствующие пробирки по 5,0 мкл анализируемого препарата ДНК.

5. Добавить в пробирки, предназначенные для «К-», по 5,0 мкл отрицательного контрольного образца, прошедшего этап выделения ДНК.

6. Центрифугировать пробирки на микроцентрифуге/вортексе в течение 1-3 сек.

7. Установить пробирки в блок детектирующего амплификатора, заполнить протокол в программном обеспечении детектирующего амплификатора и запустить программу амплификации.

Регистрация и учет результатов ПЦР проводится автоматически программным обеспечением для амплификаторов детектирующих.

Результаты испытаний

Для оценки информативности данного метода обследовано 67 женщин с синдромом привычной потери беременности с учетом особенностей полиморфизма генов PAI-1.

Средние сроки выявления субхориальных отслоек составляли 8,3±0,4 недели, средний объем – 1,32±0,25 см2. Средние сроки выявления субамниотических отслоек составляли 12,1±0,5 недель, средний объем – 17,7±6,0 см2.

При субхориальных отслойках гипоплазия хориона встречалась в 4 раза чаще, чем при субамниотических (p>

0,01).

Субхориальные/субамниотические отслойки в 2 раза чаще встречались среди носительниц полиморфизма PAI-1 (4G4G и 4G5G), чем в группе PAI-1 (5G5G).

При генотипах 4G5G отслойки встречались в 1,5 раза чаще, чем при генотипе 4G4G (p

Источник: https://edrid.ru/rid/216.012.704d.html

Мутация гемостаза SERPINE1 (PAI-1) 5G/4G – ингибитор активации плазминогена 1 типа

Ингибитор активатора плазминогена 1 типа: Ингибитор активатора плазминогена 1 типа (ИАП-1) — гликопротеин с

SERPINE1 (PAI-1)

Ингибитор активатора плазминогена 1 является одним из основных компонентов антисвертывающей системы крови. Ингибитор активатора плазминогена образуется в эндотелиальных клетках, гепатоцитах, депонируется в тромбоцитах в неактивной форме. Время полужизни активной молекулы в кровотоке – около 2 часов .

Основная функция ингибитора активатора плазминогена 1 – ограничить фибринолитическую активность местом расположения гемостатической пробки за счет ингибирования тканевого активатора плазминогена. Это выполняется за счет большего содержания его в сосудистой стенке по сравнению с тканевым активатором плазминогена.

Таким образом, на месте повреждения активированные тромбоциты выделяют избыточное количество ингибитора активатора плазминогена 1, предотвращая преждевременный лизис фибрина.

Редко встречающийся дефицит PAI-1 вызывает усиление фибринолиза и сопровождается кровотечениями.

Концентрация PAI-1 зависит как от внешних (уровень триглицеридов , курение ), так и внутренних (генетических) факторов. 

PAI является белком острой фазы . Его активность возрастает после большихопераций, тяжелых травм, инфаркта миокарда.

После введения в организмкортикостероидов, эндотоксина (бактериальный LPS) активность PAI нарастает.Статины вызывают снижение экспрессии гена PAI-1 .

Уровень тканевогоактиватора плазминогена в плазме пострадавших с травматическим шокомуменьшается в 2—3 раза, а его ингибитора в 1,8—2 раза .

Выявлено повышенное содержание PAI-1 в тучных клетках, что подтверждаетучастие этого белка в патогенезе бронхиальной астмы и других IgE-опосредованных аллергических заболеваниях . Также показано участие PAI-1 времоделировании дыхательных путей.

Активность PAI в течение беременности постепенно нарастает, и в третьемтриместре концентрация PAI-2 повышается до 100 мкг/мл (определяетсяиммунологическим методом), особенно при действии отягощающих беременностьфакторов, а после родов возвращается к норме.

У больных инфарктом миокарда отмечено повышение активности PAI и снижениесодержания и активности тканевого активатора. Часто активность PAI повышаетсяу больных венозными тромбозами. Повышение PAI у таких больных впредоперационном периоде угрожает послеоперационным тромбозом.

PAI-1 участвует в ремоделировании сосудов и репарации тканей . Показано, чтовысокий уровень PAI-1 тормозит образование intima media артерий .

Полиморфизм -675 5G>4G.

Полиморфный вариант 4G затрагивает промоторную область и сопровождаетсяповышенной экспрессией гена и повышением уровня PAI-1 в крови . В результатеснижается активность тромболитической системы.

Различия в фенотипических проявлениях генотипа PAI-1 обусловлены тем, что спромотором гена 5G может связываться как активатор, так и репрессор, а спромотором гена 4G – только активатор. Поэтому ген 5G, легко включается и легковыключается, а ген 4G легко включается, но плохо выключается (Рисунок 2).

Рисунок 2. Регуляция экспрессии гена PAI-1

По-видимому, на фенотипическое проявление данного полиморфизмасущественное влияние оказывает генетический фон, т.к. имеются существенныеразличия в зависимости от расы и пола . У китайцев 4G аллель сильнее влияет науровень PAI-1 у женщин, чем у мужчин.

Частота встречаемости генотипа, %

Клинические проявления

• Снижение фибринолитической активности крови
• Риск тромбообразования возрастает примерно в 1,7 раза как у гомозигот, так и у гетерозигот.

Дополнительные факторы риска:

• Дефицит протеина S. Показано, что риск венозных тромбозовувеличивается только у пациентов, имеющих дефицит протеина S игомозиготных по 4G аллелю.

• Избыточная масса тела 

• Гипертриглицеридемия

• Сердечно-сосудистые заболевания

Для гетерозиготного состояния данного полиморфизма (4G/5G) рисксердечно-сосудистых заболеваний возрастает незначительно .

Дополнительные факторы риска:

  • Ожирение
  • ГипертриглицеридемияМаксимальный риск сердечно-сосудистой патологии у гомозиготнаблюдается при гипертриглицеридемии .
  • Резистентность к инсулину
  • Восстановление после эпизодов сердечно-сосудистых заболеванийНосители аллеля 4G имеют повышенный риск ишемии и неблагоприятногоисхода вне зависимости от этиологии первичного эпизода (ишемическийили геморрагический) .
  • Преэклампсия 5G/4G OR=1.49
  • Бронхиальная астма . Для носителей 4G аллеля характерно снижениеобъема форсированного выдоха и повышение чувствительности бронхов кгистамину у пациентов с аллергией на домашнюю пыль.У гетерозигот 5G/4G повышен риск развития бронхиальной астмы приаллергии на домашнюю пыль (OR=2.81) .Дополнительные факторы риска:

 Генотип CD14: -159 C/C

• Данные о связи 4G аллеля с повышением риска венозной тромбоэмболиипри ГЗТ и ОК практически отсутствуют. По-видимому, большее влияние навозникновение тромбоза в этой ситуации имеет снижение естественныхантикоагулянтов и курение .

Рекомендованные дополнительные исследования

 Активность ингибитора активатора плазминогена. Активность плазминогена.
 Уровень триглицеридов
 Индекс атерогенности

 Уровень протеина S 

Источник: https://www.BabyBlog.ru/community/post/sterility/1777145

Опрелеление ингибитора активатора плазминогена типа 1 (PAI-1)

Ингибитор активатора плазминогена 1 типа: Ингибитор активатора плазминогена 1 типа (ИАП-1) — гликопротеин с

PAI-1 в качестве основного ингибитора уро-киназы (u-РА) и тканевого активатора (t-PA) иг­рает важную роль в контроле за активностью фибринолиза. Определение PAI-1 часто включа-

ется как один из тестов профиля (панели) оценки тромбофилии. У больных с кровотечениями не­ясного генеза с нормальными скрининговыми тестами дефицит PAI-1 может быть причиной па­тологии. Истинный дефицит выявляется относи­тельно редко, но сопровождается тяжелыми кро­вотечениями.

Повышение PAI-1 встречается достаточно ча­сто, так как PAI-1 – белок острой фазы. Это име­ет клиническое значение, так как является при­чиной рецидивирующего венозного тромбоза и отмечается часто у мужчин в преклонном возрас­те. PAI-1повышается при:

инфекционных и воспалительных процессах;

послеоперационном периоде;

злокачественных опухолях;

ожирении;

гипертриглицеридемии;

лечении дексаметазоном.

У больных с инфарктом миокарда персисти-рующий подъем PAI-1 рассматривается как не­благоприятный прогностический признак.

Определение PAI-1 состоит из нескольких этапов. На первом этапе необходимо инактиви-ровать ингибиторы плазмина – α2-антиплазмин и α2-макроглобулин. Затем используется общий принцип определения остаточной активности до­бавленного в избытке фактора, который должен подавляться исследуемым ингибитором (рис. 124).

Рис. 123. Принцип определения α2-антиплазмина хромогенным методом.ПАП – комплекс плазмин-антиплазмин

Рис. 124. Принцип определения ингибитора тканевого активатора плазминогена типа 1 (РАМ) хромогенным методом.u-PA – урокиназа, t-PA – тканевой активатор

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

При использовании u-РА метод в техничес­ком исполнении несколько проще, чем при ис­пользовании избытка t-PA, и может быть авто­матизирован на современных анализаторах.

PAI-1 в системе циркуляции под­вержено суточным ритмам, поэтому пробы при системном анализе необходимо брать в одно вре­мя, лучше по утрам. Кроме того, PAI-1 – один из самых неустойчивых белков плазмы, поэтому определение необходимо проводить сразу после взятия крови, транспортировка может привести к потере активности PAI-1 в пробе.

Завышенные результаты теста можно полу­чить при увеличении активности PAI-2. Этот ин­гибитор повышается при беременности, поэтому в данном случае исследование PAI-1 описанным выше методом может дать ложные результаты. В последнее время активно используется опреде­ление PAI-1 методом ELISA или комбинацией им-мунохимических и функциональных методов.

Определение тканевого активатора плазминогена (t-PA)

Тканевой активатор плазминогена (t-PA) ос­вобождается в кровоток из эндотелиальных кле­ток сосудистой стенки, где он синтезируется. По­этому диагностика дефицита t-PA основывается не только на определении концентрации t-PA в крови, но и на способности освобождаться из со­судистой стенки при стрессовых воздействиях, в

частности при манжеточной пробе (дозирован­ном пережатии вен). Сначала определяют базо­вый уровень t-PA, потом на 10-15 минут на пред­плечье накладывают жгут или раздувают манжет­ку, вызывающую венозный стаз, затем берут вто­рую порцию крови, в которой повторно опреде­ляют t-PA. Сравнивают результаты обеих проб.

Из-за быстрой инактивации тканевого актива­тора плазминогена PAI-1 и другими ингибитора­ми пробы крови необходимо немедленно закислить, чтобы предупредить инактивацию t-PA in vitro. В настоящее время выпускаются специальные пробирки с кислым антикоагулянтом.

t-PA име­ет суточный ритм, поэтому его необходимо оп­ределять так же, как PAI-1.

t-PA обладает высокой амидазной активнос­тью, позволяющей эффективно использовать для его определения метод хромогенных субстратов. Однако при низких концентрациях t-PA в плазме требуется проведение дополнительных процедур непрямого определения активности фермента че­рез плазминоген и использование растворимого фибрина (рис. 125).

Определение t-PA проводится у больных с тромбофилией как часть панели тестов на выявле­ние причины тромбофилии, особенно при нагру­зочных манжеточных пробах. Повышение t-PA после инфаркта миокарда рассматривается как неблагоприятный фактор. Нарушение освобожде­ния t-PA после венозного стаза описано у боль­ных с тромбозами и патологией почек.

Рис. 125. Принцип определения тканевого активатора плазминогена (t-PA) хромогенным методом

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Тесты активации свертывания крови

Определение D-димеров

D-димеры – это специфические продукты дег­радации фибрина, входившего в состав тромба. Они образуются в процессе лизиса сгустка крови под влиянием плазмина и некоторых неспецифи­ческих фибринолитиков (рис. 60).

Концентрация D-димеров в сыворотке пропорциональна актив­ности фибринолиза и количеству лизируемого фибрина. Этот тест позволяет судить об интен­сивности процессов образования и разрушения фибриновых сгустков.

Определение D-димеров проводится иммуно-ферментным методом с использованием монокло-нальных антител, иммунодиффузии, методом тур-бидиметрии, латекс-агглютинации (табл. 32).

Во всех методах исследования используются моно-клональные антитела к эпитопам на D-димере, которые образуются при расщеплении нераство­римого фибрина плазмином.

Этих эпитопов нет на фибриногене и растворимых фибрин-мономе­рах, поэтому D-димеры – показатель того, что в процессе фибринолиза расщепляется именно фиб­рин, а не фибриноген или фибрин-мономеры. По­скольку эти антитела не взаимодействуют с фиб­риногеном, исследования могут проводиться как в плазме, так и в сыворотке.

Принцип теста, основанный на методе ELISA на твердой фазе (стриппированные планшеты), с нанесенными на поверхность пластика первичны­ми антителами, показан на рис. 126. Так как D-ди­меры – не стандартизованный аналит, то разные методы могут показывать разные результаты,

несмотря на то, что используются специфические антитела и калибраторы.

На определение D-димеров практически не оказывает влияние техника взятия крови, примесь тромбоцитов, не требуется использования инги­биторов для подавления других факторов.

Повышение уровня D-димеров в крови оп­ределяется при возникновении венозных тром­бозов, атеротромбозе, тромбоэмболии легочной артерии, ДВС-синдроме, после операций, осо­бенно при большом операционном поле и дру­гих состояниях с повышенным образованием

Рис. 126. Принцип метода ELISA для определения D-ди­меров.Специфические антитела нанесены на твердую фазу (пластик).

С ними взаимодействует субъединица D из пробы и остается иммобилизованной на твердой фазе, До­бавляются проявляющие антитела, конъюгированные с фер­ментом, которые могут взаимодействовать только с D-ди-мерами.

Несвязавшиеся антитела отмываются, добавляет­ся субстрат для фермента, по изменению окраски раство­ра определяется количество D-димеров, D-мономеры, фор­мирующиеся при деградации фибриногена и входящие в состав ПДФ, не определяются тестом на D-димеры

Характеристики методов определения D-димеров

Таблица 32

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

фибрина. D-димеры достаточно долго циркули­руют в крови, время их полувыведения состав­ляет более 24 ч, повышение D-димеров может персистировать в течение нескольких недель после острого тромбоза.

Уровень D-димеров повышен у больных с тромбозом глубоких вен бедра, с тромбоэмболи­ей легочной артерии, он может повышаться пос­ле обширных хирургических вмешательств, травм, при онкологических заболеваниях.

На зна­чение D-димеров влияют такие факторы, как ве­личина тромба, время от начала клинических проявлений до назначения антикоагулянтной те­рапии, прием антикоагулянтов, на фоне которых уровень D-димеров постоянно снижается.

Поэто­му более важной для исключения диагноза тром­боза является отрицательная диагностическая значимость теста.

Причем для разных тестов от­рицательная диагностическая значимость колеб­лется от 78 до 100%, она выше у более чувстви­тельных методов, что характерно для ИФА-ди-агностики. D-димеры определяются в моче, но их появление интерпретируется как маркер почечной дисфункции.

Продукты деградации фибрина/фибриногена (ПДФ)

Продукты деградации фибрина/фибриногена определяются традиционно в общей группе с ис­пользованием поликлональных антител.

При этом антитела могут взаимодействовать с эпито-пами фибриногена, поэтому требуется не только использование сыворотки, но и полное удаление фибриногена с добавлением к крови тромбина или змеиного яда с тромбиноподобным эффек­том.

В последнее время для метода ELISA стали использовать моноклональные антитела к нео-эпитопам, которые образуются при деградации фибрина или фибриногена под влиянием плазми-на.

Тем не менее трудно отдифференцировать ПДФ, образующиеся при деградации фибрина из тромба, от ПДФ, сформировавшихся при дегра­дации фибриногена, особенно при использовании активаторов фибринолиза. Для определения ПДФ широко распространен метод латекс-агглю­тинации. Этот метод легко автоматизируется на турбидиметрах, но характеризуется относитель­но низкой специфичностью.

Положительная проба – содержание ПДФ в плазме/сыворотке свыше 0,5 мкг/мл – указывает на:

• ДВС-синдром;

• тромбоз глубоких вен;

• тромбоэмболию легочной артерии;

• метастазы в легкие, рак яичников;

• фибринолитическую терапию.

Тромбин-антитромбиновый комплекс (ТАТ)

Определение ТАТ – новый тест в диагностике ДВС-синдрома, он активно внедряется в практи­ку клинико-диагностических лабораторий.

Кли­ренс ТАТ из системы циркуляции достаточно бы­стрый, он удаляется в течение нескольких минут.

Поэтому присутствие ТАТ в плазме свидетельству­ет об образовании тромбина in vivo непосредствен­но в момент взятия крови на исследование и о воз­можности истощения антикоагулянтов.

В методе ELISA на твердую фазу нанесены антитела к тромбину. После отмывки проявляю­щие антитела связываются с антитромбином, при­сутствующем в ТАТ, оценка количества ТАТ про­водится цветной реакцией.

Определение ТАТ очень информативно в острой ситуации, непос­редственно при тромбообразовании. В этом пла­не определение ТАТ по диагностическому значе­нию схоже с определением фибринопептида А (ФПА), однако для ТАТ менее критичными яв­ляются требования к процедуре взятия крови.

Иногда тест с некоторыми модификациями ис­пользуется для определения антитромбина (AT).

Фрагменты протромбина F1 +2

F1+2 – также новый тест, он отражает актив­ность превращения протромбина в тромбин с уча­стием протромбиназного комплекса (фактор Ха, фактор Va, фосфолипиды и Са2+), который фор­мируется при активации системы плазменно­го гемостаза (рис. 127).

Определение F1+2, так же как ТАТ, проводится с целью диагностики состояния гиперкоагуляции, которое может быть значимым при остром и хрони­ческом ДВС, тромбозе глубоких вен бедра, эмболии легочной артерии, злокачественных опухолях и ост­рых миелоидных лейкозах (протекающих с актива­цией системы свертывания), наличии факторов рис­ка тромбоэмболии, остром инфаркте миокарда и

Рис. 127. Образование фрагмента протромбина F1+2. Протромбин расщепляется протромбиназным комплексом в 2 участках в 2 этапа с образованием разных промежу­точных продуктов, но обязательным формированием тром­бина и фрагмента F1 + 2. Между количеством фрагментов F1 + 2 и количеством образующегося тромбина существу­ет стехиометрическое соотношение
последующей тромболитической терапии. Исследо­вание F1+2 полезно использовать при мониторинге лекарственной коррекции состояния гиперкоагуля­ции, в частности при лечении гепарином и концент­ратами антитромбина. Определение ТАТ и F1+2 ха­рактеризуется высокой аналитической чувствитель­ностью, поэтому их увеличение можно зарегистри­ровать до появления клинических признаков ДВС-

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

синдрома. F1+2, в отличие от ТАТ, имеют относи­тельно продолжительный период циркуляции в сис­теме кровотока.

Состояние гиперкоагуляции мож­но зарегистрировать с помощью как ТАТ, так и F1+2, тогда как состояние гипокоагуляции можно выявить только по уменьшению F1+2.

Поэтому оп­ределение F1+2 проводится иногда с целью монито­ринга антикоагулянтов непрямого действия, эффек­тивности профилактического подкожного или внут­ривенного введения гепарина.

Определение F1+2 можно использовать для решения вопроса о назначении/неназначении те­рапевтических вмешательств у пациентов с дефи­цитом антикоагулянтов и при беременности в слу­чае риска возникновения тромбозов (табл. 33).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Источник: https://studopedia.ru/13_168971_oprelelenie-ingibitora-aktivatora-plazminogena-tipa--PAI-.html

Medic-studio
Добавить комментарий