Критерии и методы оценки чистоты культуры бактерий

Определение чистоты выделенной культуры

Критерии и методы оценки чистоты культуры бактерий

Чистота выделенной культуры микроорганизмов должны быть тщательно проверена. Это осуществляется обычно несколькими способами -визуальным, микроскопическим контролем и высевом на ряд питательных сред. При визуальном контроле просматривается рост микроорганизмов по штриху на поверхности скошенной плотной среды.

Если рост по штриху неоднороден, культура загрязнена. Такой контроль возможен только для культур, способных расти на поверхности плотных сред. Чистоту культуры микроорганизмов обязательно нужно контролировать под микроскопом.

Для этого следует приготовить препарат фиксированных окрашенных клеток и просмотреть его с иммерсионной системой или препарат живых клеток и просмотреть его, используя фазово-контрастное устройство. Чистая культура микроорганизмов, как правило, морфологически однородна, допустимо лишь незначительное варьирование размеров клеток.

Однако необходимо помнить, что клетки некоторых бактерий (например, микобактерий, нокардий и др.) очень полиморфны, поэтому определение чистоты таких культур при микроскопировании вызывает некоторые затруднения.

Чистоту культур микроорганизмов обязательно проверять высевом на питательные среды. Прежде всего, выделенную культуру высевают на плотную среду, благоприятную для ее роста.

Однородность выросших колоний – свидетельство чистоты культуры, Обязателен посев на мясо-пептонный агар (МПА) – среду, которая обеспечивает рост многих хемогетеротрофов.

Критерием чистоты культуры является однородность выросших колоний или, напротив, отсутствие роста, если данные микроорганизмы на мясо-пептонном агаре не развиваются. Следует иметь в виду, что заключение о чистоте некоторых культур нельзя сделать только по результатам высева на MIA.

Особенно это касается автотрофных микроорганизмов, а также представителей гетеротрофов, склонных развиваться с одним или несколькими спутниками. Чистоту таких культур микроорганизмов проверяют высевом на ряд сред, состав которых определяется особенностями метаболизма выделенных микроорганизмов, а также их возможных спутников.

Рост и размножение микроорганизмов.Различают: 1/ рост микробов с равномерным помутнением среды; 2/ придонный рост; 3/ пристеночный рост; 4/ поверхностный рост.

Характеризуя рост в жидкой среде, отмечают: степень помутнения –слабая, умеренная, сильная; особенности пленки при поверхностном росте– тонкая или толстая, плотная или рыхлая, гладкая или складчатая (морщинистая), бесцветная или окрашенная (указывают цвет), сухая или влажная; при образовании осадкауказывают – скудный он или обильный, плотный или рыхлый, слизистый или хлопьевидный. Нередко рост микроорганизмов сопровождается пигментацией среды, выделением газа, появлением специфического запаха, что отмечается отдельно при характеристике роста.

Для культивирования микроорганизмов необходимо наличие жизнеспособной посевной культуры (инокулята), питательной среды, содержащей все необходимые элементы питания (источник энергии, углерода, макро- и микроэлементов и, в случае потребности, факторы роста), отсутствие в среде разного рода ингибиторов роста. Необходимо также поддержание оптимальных для роста микроорганизмов физико-химических условий окружающей среды (температура, рН, давление, условия аэрации, источники света и др.).

Автотрофы (автотрофия) – организмы, способные использовать углекислоту в качестве единственного или главного источника углерода и обладающие системой ферментов для ее ассимиляции, а также способные синтезировать все компоненты клетки. Некоторые А.

могут нуждаться в экзогенных (поступающих извне) витаминах и факторах роста (ауксотрофы). В зависимости от источника энергии, используемого А.

для восстановления СО2, различают фотоавтотрофы (наземные зеленые растения; водоросли; цианобактерии, способные к оксигенному фотосинтезу; фототрофные бактерии, осуществляющие аноксигенный фотосинтез) и хемоавтотрофы, получающие энергию за счет окисления неорганических соединений и осуществляющие хемосинтез. Большинство А. ассимилируют углекислоту через восстановительный пентозофосфатный путь (цикл Кальвина). А. – продуценты органического вещества в биосфере, образующие первый трофический уровень в сообществах.

Гетеротрофы – организмы, использующие для питания органические вещества; в узком смысле слова – организмы, использующие органические соединения в качестве источника углерода.

Фотогетеротрофы, фотоорганогетеротрофы – организмы, использующие в качестве источника энергии свет, а в качестве донора электронов и источника углерода – органические соединения. К Ф. относят пурпурные бактерии, гелиобактерии, зеленые нитчатые бактерии.

Хеми…, Хемо… – составная часть сложных слов, указывающая на отношение к химии или хим. процессам.

Лекция 2.3 Типы микробных культур. Кривая роста, особенности отдельных фаз и определение параметров роста. Периодическое и непрерывное культивирование, хемостат и турбидостат

СЛАЙД 1

Название темы лекции

……………………………………………………………………………………

СЛАЙД 2

Рассматриваемые вопросы:

1.Классификация способов и систем культивирования микроорганизмов.

2. Кривая роста, особенности отдельных фаз.

3.Определение параметров роста.

4.Периодическое и непрерывное культивирование (хемостат и турбидостат).

…………………………………………………………………………………………

СЛАЙД 3

Культивирование – это выращивание микроорганизмов на питательных средах в определённых условиях, а развивающийся при этом организм называют культурой.

Для осуществления любого процесса мик­робного синтеза необходимы культура микроорганизмов, питатель­ная среда, аппаратура для выращивания и проведения вспомогатель­ных операций, средства контроля и управления.

……………………………………………………………………………………….

Культивирование или выращивание микроорганизмов является основной стадией технологического процесса и во многом определяет количественные и качественные характеристики производства микробных препаратов.

На стадии культивирования осуществляется накопление, как са­мой биомассы, так и продуктов метаболизма (жизнедеятельности) микроорганизмов.

Иногда (например, при производстве бактериальных препаратов) целевым продуктом является сама биомасса, в других случаях – про­дукты, синтезируемые клеткой (антибиотики, ферменты, аминокис­лоты). При этом синтезируемый продукт может накапливаться как внутри клеток, так и выделяться в культуральную жидкость.

Необходимые полезные свойства целевых продуктов (клеток или продуктов метаболизма) создаются, в основном, на этапе культиви­рования.

Основная задача на последующих этапах к примеру в технологии состоит в том, чтобы при выделении, сушке и других операциях максимально со­хранить и стабилизировать эти полезные свойства.

………………………………………………………………………………….

СЛАЙД 4



Источник: https://infopedia.su/15x12052.html

4 Способы определения чистоты выделенной культуры

Критерии и методы оценки чистоты культуры бактерий

Выросшие изолированныеколонии отсевают бактериологическойпетлей на поверхность скошеннойагаризованной среды в пробирке.

Посколькуизолированные колонии иногда могутформироваться не только из отдельныхклеток, обязательным этапом выделениячистой культуры должна быть проверкаих однородности.

Это осуществляетсянесколькими способами: визуальным,микроскопическим, высевом на соответствующиепитательные среды.

При визуальномконтролеисследуют рост культуры по штриху наповерхности скошенной среды; в томслучае, если рост неоднороден, считают,что культура загрязнена и требуется еедополнительная расчистка.

При описанииколоний бактерий определяют их диаметрв миллиметрах, пигментацию, форму,высоту, профиль, вид края, поверхностьколоний, отмечают степень прозрачностиколоний и их консистенцию.

На характеристикиколоний могут влиять среда, возрасткультуры, условия культивирования.

Чистоту культурмикроорганизмов обязательно нужноконтролировать путем микроскопииклеток. Дляэтого готовят препарат фиксированныхокрашенных клеток, который микроскопируютс иммерсионной системой.

Клетки чистыхкультур микроорганизмов, как правило,однородны по размеру и окраске по Граму.Однако следует помнить, что колонии,вырастающие из чистой культуры могутбыть гладкие (S)и шероховатые (R).

Кроме того, в чистых культурах многихбактерий могут появляться кокковидныеклетки, цисты, споры. Наконец, многиемикроорганизмы проявляют грамвариабельность.

Чистоту культурыклеток проверяют также и путем повторногорассева населективныесреды,обеспечивающие избирательный рост техили иных микроорганизмов. Критериемчистоты в этом случае является однородностьформирующихся при этом колоний.

5 Массовая культура на плотной среде

Выращиваниемколоний на плотной среде получаютмаксимальную плотность клеток, посколькув данном случае жидкость находитсятолько в межклеточном пространстве.

Если инокулят сильно разбавлен, каждаяклетка в результате деления дает началоотдельной колонии. Это может бытьполезным для массовой культуры, еслиотбор колонии ведут по одному признаку.

Чаще инокулят бывает не разбавлен и егоравномерно распределяют по всейповерхности среды. В этом случаемикроорганизмы растут в виде сплошногогазона.

Массоваякультура бактерий на плотной средеимеет рядпреимуществ посравнению с культурой, выращиваемой вжидкой среде:

1В случае культур, выращенных на плотнойсреде, нет необходимости использоватьцентрифугу или другие средства длясбора клеток, поскольку в этих культурахклетки находятся уже в сконцентрированномсостоянии. Особенно следует избегатьцентрифугирования при получении большогоколичества патогенных или других вредныхмикроорганизмов, поскольку при этомобразуются аэрозоли.

2 Массовые культурыбактерий на плотной среде относительносвободны от макромолекулярных компонентови полностью свободны от частиц питательнойсреды, так как последние обычно находятсявнутри агарового геля.

Такие культурыотносительно свободны от низкомолекулярныхпитательных веществ и продуктовметаболизма микроорганизмов, посколькудля их растворения необходимы значительнобольшие объемы среды.

Следовательно,культуры, выращенные на твердой среде,особенно полезны для приготовленияантигенов или для других целей, когдаважна чистота клеточной суспензии.

3 На твердых средахможно получать результаты, которыеневозможно достичь другим путем.Например, плодовые тела миксобактерийи эндоспоры определенных видов Bacillusобразуются только при росте культур натвердой среде.

Вместе с тем,выращивание микроорганизмов на твердыхсредах по сравнению с культивированиемв жидкой среде имеетопределенные недостатки:

1 Твердая культураимеет ограничения при выращиваниибольших количеств биомассы. Она даетвозможность легко получать граммыклеток; десятки граммов выращивать ужезатруднительно, а сотни граммов иликилограммы клеток на твердой среде влаборатории вырастить невозможно.

2 Твердые культурыне обеспечивают однородность популяцииклеток, т. е. культура гетерогенна вфизиологическом отношении.

Например,клетки в верхней части твердой аэробнойсреды (слой глубиной до 1000 клеток) могутнаходиться в условиях низкого содержанияпитательных веществ, но высокогосодержания кислорода, в то время как внижних слоях среды условия могут бытьпротивоположными. Гетерогенна культураи в техническом смысле, так как клеткимикроорганизмов и питательная средараспределены неравномерно.

3 Твердые культурыхарактеризуются небольшим числом клетокв пересчете на данное количество среды.

Вопросы длясамоконтроля

1Перечислите этапы выделения чистыхкультур микроорганизмов.

2 Охарактеризуйтеразличные методы получения накопительныхкультур микроорганизмов, укажитепримеры.

3 Охарактеризуйте методы выделения чистой культуры.

4 Охарактеризуйтеэтап определения чистоты выделеннойкультуры, и применяемые на этом этапеметоды.

5 Перечислитепреимущества и недостатки массовойкультуры бактерий на плотной среде.

Практическоезанятие 7

Цель:ознакомление с этапами выделения чистойкультуры; определение чистоты выделеннойисследуемой культуры: визуально,микроскопически и по однородностиколоний.

Материалы иоборудование:лупа,микроскопыбиологические, предметные стекла,покровные стекла, спиртовки, бактериальныепетли, иммерсионное масло, стерильныепипетки, пинцеты, фильтровальная бумага,спички, стерильная водопроводная вода,палочки ватные гигиенические, маркеры, дистиллированная вода для промывки,промывалки, кюветы, мостики, наборготовых растворов красок в штативе,спирт 960,культуры микрофлоры воздуха с предыдущегозанятия.

Источник: https://studfile.net/preview/5244850/page:24/

Чистая и смешаная культуры бактерий

Критерии и методы оценки чистоты культуры бактерий

Культура микроорганизмов, популяция клеток микроорганизмов (бактерии, дрожжи, актиномицеты, плесневые грибы), выращенная в жидкой или на плотной питат. средах. Различают чистую и смешанную К. м. Если на питат. среде вырастают микроорганизмы одного вида, то такая К. м. наз.

чистой; при наличии роста микробов двух или большего числа видов — смешанной. Чистоту К. м. определяют путём микроскопии мазков, приготовленных из культур в жидкой и на плотной средах, учитывая при этом однотипность колоний на плотной среде, а также на основе изучения культуральных, биохимич.

и антигенных свойств микроорганизмов.

Чистая культура – популяция бактерий, состоящая из особей одного вида.

Смешанная культура – совокупность популяций бактерий разных видов. Термином «популяция» обозначают совокупность бактерий одного вида, вегетирующих в определенном биотопе или выращенных на искусственной питательной среде из одной или нескольких клеток.

Чистая культура. Под чистой культурой понимают потомство одной единственной клетки (клон). Получить чистую культуру, с несомненностью доказать ее чистоту и уберечь от загрязняющих организмов – главная задача микробиолога.

Чистые культуры микроорганизмов, за редкими исключениями, выделяют на поверхности или внутри твердой питательной среды. Процедура начинается с отделения от клеточной популяции одной – единственной клетки, причем вырастающая из клетки колония тоже должна оставаться изолированной от других клеток и колоний.

Аэробные бактерии выделяют по методу Коха – рассеивают суспензию по поверхности среды в чашках Петри или применяют менее трудоемкий метод – размазывают каплю платиновой петлей по агаризованной среде. Анаэробные бактерии суспендируют в расплавленном агаре (45°С) и проводят инкубацию без доступа воздуха.

Тщательное отделение одной колонии, повторное суспендирование в жидкой среде и повторное нанесение штриха или разведение в агаре позволяют получать чистые культуры большинства микроорганизмов.

Смешанные культуры. Естественные популяции, как правило, представляют собой смесь различных микроорганизмов. Между ними существуют самые различные формы взаимодействия; это может быть конкуренция за общий субстрат, комменсализм или мутуализм.

Для изучения этих и других форм взаимодействия все чаще используют смешанные культуры. Если создать определенные заданные условия, то как в периодических, так и в непрерывных проточных культурах можно наблюдать последовательную смену (сукцессию) от дельных организмов и накапливаемых продуктов обмена.

Это в свою очередь позволяет делать выводы о синэргистических или антагонистических взаимоотношениях между различными организмами. Смешанные культуры могут быть приготовлены путем объединения чистых культур.

Исследования, проводимые на смешанных культурах заданного состава, дают возможность понять, какими могут быть сложные формы взаимодействия микроорганизмов в местах их естественного обитания.

В домашнем обиходе и в промышленности применяют отнюдь не только чистые, но и смешанные культуры. Некоторые из них назвали «естественными чистыми расами». Примерами могут служить кислое тесто, кефир, чайный гриб и «чистые расы» дрожжей. Большую роль смешанные культуры играют также при очистке сточных вод.

Оценка чистоты культур аэробных бактерий на втором этапе… исследования

На втором этапе проводят исследование колоний бактерий, происходящих от одной бактериальной клетки и выросших на плотной питательной среде (колония и является чистой культурой возбудителя).

Производят макроскопическое и микроскопическое исследование колоний в проходящем и отраженном свете, невооруженным глазом, с помощью лупы, под малым увеличением микроскопа. Отмечают культуральные свойства колоний: их величину, форму, цвет, характер краев и поверхности, консистенцию, структуру.

Далее часть каждой из намеченных колоний используют для приготовления мазков, окрашивают мазки по Граму, микроскопируют, определяя морфологические и тинкториальные (отношение к окраске) свойства выделенной культуры и одновременно проверяя ее чистоту.

Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирки со скошенным агаром (или другой оптимальной для данного вида средой) с целью накопления чистой культуры для более полного ее изучения. Пробирки помещают на 18-24 ч в термостат. Кроме перечисленных исследований на втором этапе нередко подсчитывают количество выросших колоний.

Особенно большое значение это имеет при заболеваниях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, так как в этих случаях судить о ведущей роли того или иного возбудителя можно лишь по содержанию его в патол. материале в большом количестве и преобладанию над другой флорой.

Для проведения такого исследования готовят последовательные разведения исследуемого материала, из к-рых производят высев на чашки с питательной средой, подсчитывают число выросших колоний, умножают на разведение и таким образом определяют содержание микробов в материале.

Третий этап заключается в идентификации выделенной чистой культуры возбудителя и определении его чувствительности к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам. Идентификацию выделенной бактериальной культуры осуществляют по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным, токсигенным свойствам.

Прежде всего делают мазок из культуры, выросшей на скошенном агаре, изучают морфологию бактерий и проверяют чистоту культуры бактерий. Затем производят посев выделенной чистой культуры бактерий на среды Гисса, желатин и другие среды для определения биохимических свойств.

Биохимические, или ферментативные, свойства бактерий обусловлены ферментами, участвующими в расщеплении углеводов, белков, вызывающими окисление и восстановление различных субстратов.



Источник: http://biofile.ru/bio/20044.html

105 – микробиология экзамен

Критерии и методы оценки чистоты культуры бактерий

98.   Микробиологическая диагностика ВБИ: правила забора итранспортировки материала, общая схема выделения и идентификации возбудителей,критерии этиологической значимости выделенной культуры м/о. Особенности леченияи профилактики ВБИ, микробиологическая диагностика бактериемии и сепсиса.

Микробиологическаядиагностика

Микробиологические методыимеют решающее значение в постановке этиологического диагнозаоппортунистических инфекций, выработке рациональной схемы терапии ипредупреждении развития рецидивов заболевания.

Микробиологическиеисследования при оппортунистических инфекциях направлены на выделение неодного, а нескольких основных микробов, находящихся в исследуемом материале, ане на индикацию одного специфического патогена, как это принято призаболеваниях, вызванных патогенными микробами.

Основным методоммикробиологической диагностики оппортунистических инфекций являетсябактериологический.

При использовании этогометода следует учитывать:

•  в материале от больного, как правило,присутствует ассоциация микробов, в которую входят как возбудители заболевания,так и заносные из других органов и внешней среды виды, а также микробы, которыемогут попасть в материал при его заборе и доставке;

•  количественный и видовой состав микрофлорыварьирует у разных больных и меняется в процессе болезни, особенно прииспользовании антибактериальных препаратов.

Достоверностьбактериологического исследования зависит: от правильного забора материала отбольного; применения эффективного набора дифференциально-диагностических иселективных питательных сред; использования количественного посева материала;этапности идентификации выделенных чистых культур (семейство, род, вид и внеобходимых случаях вариант); определения свойств, указывающих на патогенностькультур и их принадлеж- ность к госпитальным штаммам.

Обязательным должно бытьопределение антибиотикограммы, а также свойств культур, необходимых дляэпидемиологического анализа, – фаговара, серовара, резистенсвара и др.

С целью определения смены возбудителейи изменения их свойств микробиологический мониторинг следует проводить черезкаждые 5-7 дней.

Микроскопический методпозволяет выявлять в мазках патологического материала бактерии только в случаеих массивного содержания (105 КОЕ/мл и более) и из-за близости морфологиибактерий позволяет только ориентировочно судить о возбудителе, относя его ккрупным таксонам (палочки, кокки, спирохеты, грамположительные илиграмотрицательные и т.п.). Результаты микроскопии могут быть использованы привыборе питательных сред для дальнейшего выделения возбудителя. Приидентификации грибов и простейших возможности микроскопического методанесколько шире. Введение в практику РИФ расширяет возможности микроскопическогометода, но и в этом случае он не может заменить бактериологический метод,поскольку не позволяет определить чувствительность возбудителя кхимиотерапевтическим препаратам и ряд других необходимых для практики свойств.

Серологический метод имеетвспомогательное значение. С его помощью не удается установить спектр и уровеньактивности антимикробных препаратов по отношению к возбудителю болезни ипровести внутривидовое типирование.

Возможности серологического методаограничивают выраженная мозаичность антигенной структуры многих УПМ, наличие кним антител у здоровых людей и слабая выраженность иммунного ответа на антигеныУПМ.

Тем не менее при затяжных и хронических формах болезни серологическийметод иногда позволяет установить этиологию болезни. Серологические реакцииставятся с парными сыворотками больного и аутокультурой, результат оцениваетсяпо сероконверсии в 4 раза и более.

На сегодняшний день слабо разработаныдиагностические препараты, основанные на иммунных реакциях (ИФА,иммунофлюоресцентные диагностикумы, моноклональные антитела) к УПМ.

Биологический метод обычно неиспользуется из-за неспецифичности клинической картины, вызываемой УПМ улабораторных животных, и содержания в патологическом материале микробныхассоциаций, которые при заражении животных претерпевают изменения.

Аллергологический метод всвязи с отсутствием сенсибилизации или ее малой специфичностью не используется.

20.7.1. Правила забора,хранения и транспортировки материала

Результаты микробиологическойдиагностики зависят от правильного выбора материла и соблюдения условий его забора,до- ставки, хранения и обработки.

•  Вид материала определяется клиническойкартиной заболевания и должен соответствовать локализации предполагаемоговозбудителя с учетом патогенеза болезни.

•  Количество материала должно быть достаточнымдля проведения исследования и его повторения в случае необходимости.

•  Материал берут по возможности в начальномпериоде болезни.

•  Взятие материала должно осуществляться доначала антибактериальной терапии или через определенный промежуток временипосле ее назначения, необходимый для выведения препарата из организма.

•  Материал необходимо брать непосредственно изочага инфекции или исследовать соответствующее отделяемое (гной из фистулы,мочу, желчь и др.).

•  Забор материала необходимо проводить во времянаибольшего содержания в нем микробов.

•  Необходимо предупредить контаминациюматериала нормальной микрофлорой больного и микробами окружающей среды.

•  Следует предупредить возможность попадания вматериал антимикробных препаратов (дезинфектантов, асептиков, антибиотиков),исключить контакт с металлами, обладающими олигодинамическим свойством, сватой, содержащей свободные жирные кислоты.

•  Любой клинический материал долженрассматриваться как потенциально опасный для человека. Поэтому при его заборе,хранении, доставке, обработке во избежание заражения должны соблюдаться такиеже меры техники безопасности, как при работе с патогенными микробами.

•  Транспортировку клинического образца влабораторию следует производить в максимально короткие сроки.

•  К клиническому образцу, направляемому влабораторию, прилагают сопроводительный документ, содержащий основные сведения,необходимые для проведения микробиологического исследования (характерматериала, фамилию, имя и отчество больного, название учреждения или отделения,номер истории болезни, предположительный диагноз заболевания, предшествующуюантимикробную терапию, дату и время взятия материала, подпись врача,направляющего материал на исследование).

•  В процессе транспортировки материал следуетоберегать от действия света, тепла, холода, механических повреждений.

•  После исследования остатки материала подлежатуничтожению (автоклавированию или сжиганию), а посуда, контейнеры, инструменты- обеззараживанию.

20.7.2. Выделениевозбудителей оппортунистических инфекций

1-й день. Осуществляют забори доставку материала в лабора- торию. Материал в необходимых случаяхобрабатывают с целью гомогенизации и концентрации. Готовят и окрашивают мазкипо Граму. В необходимых случаях дополнительно применяют специальные методы окраски.

https://www.youtube.com/watch?v=KKK-ueKi_M0

Готовят разведения патологического материала от 10-1 до 10-6 в теплом 0,5%растворе хлорида натрия с 0,01% желатина (для предупреждения осмотического шокабактерий) и делают высев 0,1 мл материала из разведений на чашки Петри спитательной средой-газоном (на 3 чашки из каждого разведения).

В стандартныйнабор питательных сред желательно включить желточно-солевой агар (длястафилококков), среду Эндо или эозинметиловый агар (для энтеробактерий),кровяной агар (для стрептококков и ряда других требовательных к питательнымсредам видов), среду Сабуро (для грибов), среду для контроля стерильности илидругие среды для анаэробов.

В случаях, когда имеются указания на вероятныйвозбудитель (клиническая симптоматика, вид патологического материала,результаты микроскопии), должны быть использованы более селективные среды.

2-й день. Определяют характерроста на питательных средах. Подсчитывают количество колоний каждого типа начашках с посевом разведений патологического материала для расчетаобсемененности материала по формуле: Х КОЕ = N * ПД *СР, где N – число колоний,ПД – посевная доза, СР – степень разведения.

Микроскопируют мазки извыросших колоний. Отсевают на среду накопления колоний различных типов. Дляповышения досто- верности исследования желательно отсевать 2-3 колонии одноготипа. Эта мера вызвана гетерогенностью популяции; она удорожает исследование,но зато резко повышает его достоверность. При наличии методов и возможностейпроводят ускоренную идентификацию.

3-й день. Установлениечистоты культуры. Идентификация чистых культур. Определение антибиотикограммывыделенных культур.

4-5-й день. Проводят учетрезультатов тестов, использованных для идентификации.

Оформление заключения(семейство, род, вид выделенных культур; обсемененность материала, КОЕ/мл илиКОЕ/г; анти- биотикограмма; этиологическая значимость выделенных культур исостав их популяций). По клиническим и эпидемиологическим показателямопределяют факторы патогенности и эпидемиологические маркеры (фаго-, серо-,резистенс-, бактериоциновары и др.) у этиологически значимых культур.

20.7.3. Критерииэтиологической роли выделенной культуры

Для установленияэтиологической роли патогенных микробов достаточны выделение микроба изматериала от больного, обнаружение в сыворотке крови специфеческих антител вдиагностическом титре или сероконверсии в ходе болезни в 4 раза и более,корреляция между выделенным микробом и клинической картиной болезни.

Критерии этиологической ролиУПМ более сложны. Основное значение в установлении этиологии заболевания имеютдва кри- терия.

•  Выделение УПМ из крови и ликвора, чтоподтверждает этиологическую роль этого УПМ.

•  Численность популяции обнаруженного впораженном органе (кроме крови и ликвора) УПМ, так называемое критическоечисло, которое рассчитывают на 1 мл исследуемого материала (мочи, мокроты).

Обычно за такое критическое число для бактерий принимают дозу 105 КОЕ/мл, длягрибов и простейших – 103-104.

В случае выделения из патологического материаланескольких видов или вариантов УПМ за ведущего возбудителя принимаютколичественно доминирующую популяцию. Сле-

дует учитывать, чточисленность популяции возбудителя в процессе болезни меняется: при переходе вхроническую форму, в период выздоровления и ремиссии, в процессе химиотерапии,в присутствии конкурента она существенно снижается. (Дополнительные критерииустановления этиологической роли УПМ изложены в материалах диска.)

20.8. Лечение

Лечение оппортунистическихинфекций представляет собой сложную задачу и должно проводиться комплексно.Комплексное лечение включает адекватное хирургическое вмешательство,рациональную антимикробную химиотерапию, иммунотерапию.

Поскольку приоппортунистической инфекции нередко образуются гнойные очаги, необходима ихсанация.

Учитывая широкоераспространение среди УПМ множественной лекарственной устойчивости кантибиотикам, назначать эти препараты больным необходимо с учетом результатовопределения антибиотикограммы выделенных от больного УПМ.

Врач назначаетантибиотикотерапию эмпирически. При этом следует отдать предпочтение препаратамширокого спектра действия. При получении результатов антибиотикограммыпроводимая больному химиотерапия должна быть скорректирована в соответствии сполученными результатами.

Комплексное лечениеоппортунистических инфекций включает в себя и иммунотерапию, если противданного УПМ, вызвав- шего заболевание, разработаны соответствующие лечебныеиммунобиологические препараты направленного действия.

Так какоппортунистические инфекции развиваются у лиц с пониженным иммунным статусом,при наличии соответствующих клинических показаний и при обязательном контролепараметров иммунного статуса таким больным показано проведение иммунокоррекциис применением иммуномодуляторов.

20.9. Профилактика

Профилактикаоппортунистических инфекций проводится в трех направлениях: выявление источникаинфекции, разрыв меха- низмов, путей и факторов передачи, воздействие навосприимчивый коллектив.

Мероприятия первой группыпредусматривают изоляцию и лечение больных, а также выявление и санациюносителей. Для это- го в хирургических стационарах соблюдается принципразобщения чистых и гнойных больных, которые не должны контактировать друг сдругом.

В больничных учреждениях имеются чистые и гнойные хирургическиеотделения и операционные. Если стационар располагает только одной операционной,то операционный день начинается с выполнения плановых чистых операций, а по ихзавершении начинают оперировать плановых гнойных больных.

После окончанияоперации операционная тщательно дезинфицируется.

Так как распространениегоспитальных штаммов часто связано с носителями, особенно из числа медперсоналабольничных учреждений, необходимо выявлять и санировать этих носителей.

Дляэтого проводят ежедневный осмотр медперсонала (особенно хирургических иродильных отделений) перед началом работы с целью выявления и отстранения отработы лиц с гнойно- воспалительными процессами (гнойничковые поражения кожирук, катаральные явления в носоглотке и т.п.

), а также периодически проводятбактериологическое обследование медперсонала на носительство. Выявленных носителейотстраняют от работы и подвергают санации.

Мероприятия второй группынаправлены на разрыв механизмов и путей передачи инфекции, предусматриваюторганизацию и строгое соблюдение санитарно-гигиенического режима в больничныхучреждениях, неукоснительное соблюдение медперсоналом правил асептики,антисептики, дезинфекции и стерилизации.

Мероприятия третьей группынаправлены на повышение коллективной резистентности людей путем улучшениясоциально- бытовых условий, применение иммуномодуляторов, адаптогенов илидругих иммунобиологических препаратов. При наличии дисбиозов целесообразноназначать пробиотики.

Источник: https://www.sites.google.com/site/mikrobiologiaekzamen/105

Культура бактерий смешанная, чистая: определение, посев

Критерии и методы оценки чистоты культуры бактерий

Мир вокруг нас просто кишит различными микроорганизмами. Они есть в воздухе, воде, почве, в нашем организме, они способны выживать даже в открытом космосе.

Как же изучать и идентифицировать бактерии одного вида, как исследовать болезнетворные вирусы? Проблема в том, что микроорганизмов просто невероятно много, и все они разные.

Но скопление (популяцию, колонию) бактерий одного и того же вида можно рассматривать как единый организм, что значительно упрощает определение и изучение микробов. Культура бактерий и есть такое искусственно выведенное с помощью посева скопление микроорганизмов.

Бактериальные культуры: чистые против смешанных

В микробиологии культурой бактерий называют популяцию микроорганизмов, растущую на питательной среде, которая используется в научных и медицинских целях. Различают:

  1. Чистые культуры. Микроорганизмы одного и того же вида, выращенные в искусственной среде in vitro («в пробирке») и являющиеся потомками одной бактериальной клетки. Своего рода изолированное скопление микроорганизмов, выведенное с помощью посева на питательных средах.
  2. Смешанные культуры. Сообщество бактерий разных видов, первоначально взятое из естественных источников (воздуха, воды, почвы) и культивированное (выращенное) в лабораторных условиях.

Чистая культура используется:

  • в научных исследованиях;
  • при диагностике инфекционных заболеваний;
  • как исходный материал для производства вакцин, ферментов, антибиотиков, витаминов, гормонов и др.;
  • в промышленном производстве (молочнокислые закваски, пивные и обычные дрожжи и т.д.).

Смешанная культура дает определение о поведении микробов «в естественной среде». То есть ученые получают возможность проследить за взаимодействием бактерий различного вида, появлением новых свойств, присущих микроорганизмам, только в «сожительстве» с другими видами.

В отличие от математических законов в случае со смешанной культурой ее свойства не являются суммой свойств микробов, входящих в нее.

Напротив, свойства такой субстанции могут сильно отличаться от характеристик составляющих ее микроорганизмов при их посеве и культивировании в изоляции (чистая культура).

Несмотря на то что выведение чистых культур стало мощным толчком в развитии микробиологии (и до сих пор является ее основным инструментом), смешанные культуры дают более полную картину окружающего мира, так как в природе скопления бактерий одного и того же вида обязательно контактируют с различными микроорганизмами, находящимися по соседству. Особую важность определение смешанной культуры приобретает в медицине, при исследовании взаимодействия различных инфекций с микрофлорой организма.

То есть определение заболевания основано на выведении чистых культур, а для полного изучения болезни в развитии необходимо исследовать смешанные культуры.

Выделение чистых культур

Как уже было сказано, чистая культура – многочисленное потомство одной-единственной клетки. Возникает вопрос: как же изолировать эту самую клетку? Ведь в образце, взятом для лабораторного анализа, находится огромное множество бактерий, причем необязательно одного и того же вида.

Для выведения чистой культуры существует несколько различных методов:

  1. Метод Луи Пастера (французский химик, один из основоположников микробиологии). Суть метода в последовательном разведении изучаемого образца в жидкости (в пробирке) до получения единичной клетки в заданном объеме. Этот метод интересен скорее в историческом, чем в практическом плане.
  2. Метод Роберта Коха (немецкий микробиолог). При этом способе исследования материал разводят в агар-агаре (при t⁰ 48-50), который затем разливают по чашкам Петри и дают застыть. Для посева (разлива) используют несколько последних разведенных образцов, где количество клеток значительно меньше. В дальнейшем это облегчает определение в глубине агар-агара и перенос колоний (скопление микробов, выросшее из единичной клетки) на другие питательные среды для непосредственного выведения чистой культуры.
  3. Метод Дригальского (немецкий исследователь). Пожалуй, самый распространенный вариант исследования. Метод состоит в том, что материал для анализа разводят в пробирке физраствором или бульоном, затем единственную каплю из пробирки переносят в чашку Петри (делают посев) и распределяют шпателем. Затем, не меняя и не стерилизуя шпатель, делают посевы поочередно в двух и более чашках. В последнем посеве на шпателе остается минимальное количество бактерий. Появляется высокая вероятность, что единичная клетка будет изолирована и на питательной среде разрастется в колонию бактерий одного вида.

Кроме этих, есть еще несколько специальных методов, применяемых для микроорганизмов, гибнущих на открытом воздухе или проводимых с помощью современной высокоточной техники.

Выделенные культуры бактерий одного и того же вида тщательно консервируют (высушивают, изолируют от атмосферы, подвергают заморозке и т. д.) и хранят в соответствии с инструкциями.

Коварная кишечная палочка

Наглядным примером использования бактериальных культур в медицине может стать кишечная палочка. С одной стороны, микроорганизмы группы кишечной палочки постоянно присутствуют в организме человека и животных, т.е.

являются частью нормальной микрофлоры кишечника.

С другой стороны, некоторые штаммы могут не только представлять опасность для здоровья, но и привести к смертельному исходу у людей с ослабленным иммунитетом (старики, маленькие дети).

Безвредные штаммы кишечной палочки, обитающие в организме хозяина, синтезируют необходимые витамины и «сражаются» с патогенными бактериями, попадающими в кишечник, отбирая у них пищу и жизненное пространство. Однако та же кишечная палочка отвечает за развитие:

  • тяжелых пищевых отравлений;
  • диареи;
  • перитонита (при попадании в брюшную полость через разрыв в кишечнике);
  • бактериального простатита;
  • менингита у новорожденных и т.д.

Важной задачей является определение типа кишечной палочки и количества этих бактерий в организме человека. Для этого берутся анализы мочи, кала, мазок из влагалища, гноя, рвотных масс. Затем проводят выделение чистой культуры бактерий.

Определить патогенность (опасность для здоровья) колонии микроорганизмов по внешнему виду достаточно сложно, ведь в нормальной микрофлоре тоже присутствует кишечная палочка. Поэтому изучают не только морфологию (форму и строение), но и биохимические свойства (процесс жизнедеятельности, влияние на окружающую среду).

Затем полученные результаты сравнивают с имеющимися данными о «поведении» патогенных бактерий и назначают лечение.

Кроме того, микробиология научилась использовать свойства кишечной палочки для определения загрязнения окружающей среды. Дело в том, что кишечная палочка выводится из организма человека и животных вместе с фекальными массами. В случае попадания стоков в водоемы есть риск появления патогенных бактерий в обычной водопроводной воде, что может привести к серьезным эпидемиям.

Чтобы избежать подобного сценария, санитарно-эпидемиологическая служба регулярно берет образцы для лабораторных анализов. Именно кишечная палочка служит надежным индикатором чистоты воды.

От того, какое количество бактерий одного вида будет найдено в образце, зависит показатель чистоты.

Более того, анализируя полученные результаты можно даже определить источник загрязнения, то есть выяснить, кто является «поставщиком» бактерий: человек или животные.

Бактериальные культуры в промышленности

Применение бактериальных культур в промышленности можно рассмотреть на примере молочнокислых бактерий. Представители одного и того же вида встречаются в организме человека и животных, на растениях, в молоке и молочнокислых продуктах. Они принимают участие в сбраживании молока, квашении капусты, силосовании кормов и даже в изготовлении заменителя плазмы крови.

Понятно, что в промышленных масштабах нельзя пускать процесс брожения, за который отвечают молочнокислые бактерии, на самотек. Следовательно, нужны значительные объемы бактерий одного и того же вида, чтобы получившийся в результате продукт всегда имел строго определенные свойства.

Возникает вопрос: как же вырастить требуемый объем молочнокислых бактерий (закваску)? Для этого понадобится питательная среда и собственно культура молочнокислых микроорганизмов, т.е. колония бактерий одного и того же вида, полученная в лабораторных условиях.

В промышленности используют так называемую периодическую систему культивирования молочнокислых бактерий, т.е. в питательную среду вносят определенное количество микроорганизмов, после чего больше не вмешиваются в процесс их размножения.

Во время развития биомасса проходит несколько стадий (периодов).

Сначала бактерии активно размножаются, затем количество пищи в питательной среде естественным образом уменьшается и микроорганизмы приостанавливают рост, а некоторые начинают отмирать.

Следовательно, периодическая система поддерживает рост колоний молочнокислых бактерий в течение определенного времени, после которого размножение прекращается и начинается отмирание клеток.

В определенный период времени число живых бактерий становится равно количеству отмерших – наступает своеобразное равновесие.

Именно в этот момент и приступают к сбору «урожая» молочнокислых бактерий, которые затем используют для приготовления наших любимых сыров, йогуртов, кефира, сметаны и других вкусных и полезных продуктов.

Казалось бы, какое отношение могут иметь выращенные в лаборатории бактерии к нашей повседневной жизни, но на практике микробиология настолько тесно вошла в наш обиход, что трудно даже представить, как можно обойтись без продуктов и технологий, созданных учеными-микробиологами.

Образование высшее филологическое. В копирайтинге с 2012 г., также занимаюсь редактированием/размещением статей. Увлечения — психология и кулинария.

Источник: https://probakterii.ru/prokaryotes/raznoe/kultura-bakterij.html

Medic-studio
Добавить комментарий