Методические рекомендации по хранению культур микроорганизмов в

ПОИСК

Методические рекомендации по хранению культур микроорганизмов в
    Хранение культуры и размножение посевного материала в лаборатории. Культуры микроорганизмов — продуцентов веществ— заводы получают из институтов (коллекции культур) в пробирках на косом агаре или в ампулах, законсервированными в виде чистых культур.

Каждая культура имеет паспорт с подробным описанием морфологии, физиологии, характеристики среды для культивирования и хранения культуры. [c.97]
    Среды для хранения культур предназначены для длительного сохранения чистых культур микроорганизмов в условиях лаборатории, Основным требованием для них является способность дли- [c.

28]

    В большинстве бактериологических лабораторий организованы музеи живых культур микроорганизмов, используемые в процессе обучения, в исследовательских, промышленных и других целях.

Правильное хранение культур является чрезвычайно важной проблемой, которой следует уделять (но часто не уделяется) такое же внимание, как стандартизации оборудования и выбору химических веществ. Потеря или изменение свойств основных культур вследствие их неправильного хранения помешали выполнению многих научных программ. [c.512]

    Традиционным методом хранения бактериальных культур является их периодический пересев на свежие среды. Интервал между пересевами зависит от микроорганизма, используемой среды и внешних условий.

Некоторые бактерии следует пересевать через день, другие — только через несколько недель или месяцев.

При использовании этого метода для хранения культур должны быть соблюдены три условия 1) подходящая поддерживающая среда 2) идеальная температура хранения  [c.513]

    Простейшим способом является хранение культур микроорганизмов при комнатной температуре в штативе или в специально сконструированном для хранения боксе, в котором имеются полки с отверстиями для пробирок. При таком хранении культур необходим постоянный [c.513]

    Кроме основного рабочего помещения лаборатория имеет стерилизационную, где размещены автоклавы и сушильные шкафы, бокс, моечную, холодильную комнату, термостаты или термостатированные комнаты для выращивания микроорганизмов, помещение для хранения культур и т. д.

Бокс служит для пересевов микроорганизмов и представляет собой небольшую изолированную комнату, разделенную перегородкой на две части.

Входят в рабочее помещение бокса через тамбур с раздвижной дверью, что исключает резкое перемещение воздуха и, следовательно, занесение извне посторонних микроорганизмов.

Оборудование бокса состоит из стола, стула, газовой горелки и бактерицидной лампы, укрепленной в специальном штативе или смонтированной на потолке бокса. Удобно иметь в боксе подсобный стол, на котором размещают необходимые во время работы предметы. [c.22]

    Плотные среды используют для выделения чистых культур, в диагностических целях для описания колоний, для определения количества микроорганизмов, их антибиотической активности, для хранения культур в коллекциях и в ряде других случаев. С целью уплотнения сред применяют агар или желатину. Плотной основой [c.51]

    Частота пересева на свежую среду различных микроорганизмов неодинакова и в большой степени определяется их свойствами.

Многие микроорганизмы можно пересевать один раз в 1—2 месяца, хотя есть микроорганизмы, например молочнокислые бактерии, которые нуждаются в более частых пересевах.

Допустимые сроки пересевов некоторых микроорганизмов приведены в Приложении. Хранение культур в холодильнике при 4—6° позволяет увеличить время между пересевами. [c.65]

    Непременным условием правильно поставленного промышленного процесс являются также мероприятия по сохранению микроорганизмов-продуцентов.

Существует ряд методов хранения производственно ценных штаммов, обеспечивающих их высокую биохимическую активность. В музеях живых культур при заводских лабораториях культуры периодически пересеваются.

Однако пересевы через короткие промежутки времени могут снизить активность микроорганизмов, [c.55]

    Споры микроорганизмов, которые образованы неполовым путем, представляют собой наилучшую форму сохранения исходной, музейной культуры продуцента биологически активных веществ.

Однако при длительном хранении даже совершенно однородных клеток и спор могут возникнуть спонтанные нерегулируемые мутации.

Поэтому необходимо не только соблюдать правила хранения и поддержания исходной культуры, но и периодически проводить рассев культуры и проверку ее однородности как по морфологическим, так и по физиологическим признакам. При рассеве из колонии, [c.93]

    Готовую культуру в пробирках помещают в холодильник и хранят при температуре 3 — 4° С. Пересевы культур проводят через определенные промежутки времени с таким расчетом, чтобы наилучшим образом сохранить физиолого-биохимические свойства штамма.

Длительные промежутки между пересевами недопустимы, так как микроорганизм в процессе роста и хранения потребляет из среды питательные вещества и накапливает продукты обмена, вредно влияющие на его свойства. При пересевах следует переносить только споры или небольшие кусочки мицелия без питательной среды, чтобы в свежую питательную среду не вносить продукты метаболизма.

Для длительного хранения некоторых штаммов целесообразно использовать бедные сахарами крахмальные среды. [c.94]

    С навозом 3 почву вносится громадное количество микроорганизмов, которые в ней интенсивно разрушают плодовые и семенные оболочки семян сорняков.

При внесении навоза, очищенного от сорных семян, в паровое поле происходит более быстрое прорастание семян сорняков, находящихся в почве, и при систематическом рыхлении ее уничтожается много сорняков во всем пахотном слое. Навоз улучшает физические свойства почвы. Все это способствует быстрому росту и развитию культур, идущих после пара.

Такие культуры затеняют почву и начинают подавлять сорняки. Следовательно, при хорошем хранении навоза он не засоряет полей, а помогает вести борьбу с сорняками. [c.133]

    Устойчивость. Триаллат устойчив при хранении. Поскольку он летуч (так же, как и диаллат), после опрыскивания следует заделывать его в почву [992], чтобы избежать потерь действующего вещества.

При нормах расхода, применяемых обычно да практике, триаллат действует на песчаных почвах несколько дольше, чем на суглинистых, и в общем примерно вдвое дольше, чем диаллат. Разложение его происходит в основном под действием микроорганизмов.

После весеннего применения триаллата время ожидания перед посевом чувствительных культур, например овса или трав, должно составлять не менее шести месяцев. В холодные зимние месяцы он разлагается еще медленнее или совсем не разлагается.

Поэтому, если обработка проводилась поздней осенью (озимые злаки, рапс), то с возделыванием чувствительных культур в некоторых случаях следует подождать вплоть до следующего вегетационного периода [881, 885, 992]. [c.224]

    Предложен для борьбы с сорными растениями при возделывании капусты, риса и ряда других культур при нормах расхода 6—8 кг/га.

Рекомендован также для борьбы с сорняками в шалфее мускатном в фазу 2 настоящих листьев культуры и розетки при норме расхода 4 кг/га.

Устойчив при хранении, но в почве под влиянием микроорганизмов и в результате адсорбции коллоидами почвы быстро теряет активность. [c.80]

    Разработка простых и эффективных методов хранения микроорганизмов позволила создать коллекции культур, которые в настоящее время являются основными источниками для исследователей, работающих в области трансформации стероидов. Такие коллекции имеются в ряде стран названия и местонахождение наиболее известных из них приведены ниже [7]. [c.40]

    Основными целями хранения является поддержание жизнедеятельности клеток и чистоты культур, а также предупреждение изменений и мутаций, т. е. сохранение микроорганизма в состоянии, максимально близком к исходно выделенному штамму.

Существует много методов хранения бактерий, однако не все штаммы при использовании какого-либо из них ведут себя одинаково. Выбор метода часто определяется наличием оборудования, места для хранения и квалифицированных сотрудников. [c.

512]

    Хранение микроорганизмов осуществляется в специальных коллекциях типовых культур. В крупных коллекциях имеются [c.149]

    Перспективным следует признать способ хранения культур в лиофилизованном состоянии. Культуру микроорганизма помещают в защитную среду, замораживают и подвергают вакуумной лиофильной сушке.

В качестве защитной среды можно использовать сахаро-же-латинную среду.

Клетки микроорганизма помещают в стерильные ампулы, закрывают стерильными ватными тампонами и быстро замораживают при температурах [c.95]

    Предел жизнеспособности организма определяется наличием жидкой воды. Клетки некоторых микроорганизмов остаются жизнеспособными при минусовых температурах, если к воде добавить антифриз. Так как местообитаний, где создаются экстремально низкотемпературные условия не так много, большинство организмов имеет низший температурный предел О °С.

Существовать же (переживать) микроорганизмы могут и при -196 °С (и даже при -273 °С). Поэтому таким глубоким замораживанием часто пользуются для хранения культур под жидким азотом или в лио-филизированном состоянии.

Нижние пределы роста по температуре ограничены температурой застывания мембраны, когда она теряет свои функции, а верхние — тепловой денатурацией жизненно важных молекул. [c.91]

    Обзор работ, посвященных способам хранения культур, представлен в сборнике Методы хранения коллекциопных культур микроорганизмов ) (1967 г.). Авторами приведен материал по хранению грибов (Белякова, [c.208]

    Метод хранения на агаре широко используется и для других групп микроорганизмов. Он незаменим для хранения культур, обладающих пониженной жизнеспособностью, которые плохо сохраняются в состоянии анабиоза (Кузнецов, 1967).

Однако из-за частоты пересевов этот метод не может удовлетворить исследователей не только потому, что при обширной коллекции это требует больших затрат труда, а главное, как это уже отмечалось в начале этой статьи, могут изменяться физиологические свойства культуры.

Попытка удлинить срок хранения па агаре, а следовательно, уменьшить возможность изменений культуральных свойств, привела к обнадеживающим результатам (Одоевская и др., 1969).

Две трети культур, несмотря на неблагоприятные условия (потеря влажности агаровой средой, в которой находились водоросли), оказались жизнеспособными после трехлетпего срока хранения без нересева и половина — после шестилетнего. Причиной гибели ряда культур явилось чрезмерное высыхание. [c.216]

    Холодильники. Используются в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, кроЬи, вакцин, сывороток и прочих биологически активных препаратов при температуре озсоло 4°С. Для сохранения биопрепаратов при температуре ниже 0°С используются низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура -20°С и ниже. [c.8]

    Для производства посевного материала используют исходный штамм продуцентов, получаемый из лабораторных чистых культур, который вырашдвают разными способами на предварительно стерилизованной твердой или жидкой питательной среде до определенного возраста.

Посевной материал консервируют (высушиванием или хранением при низких температурах) вплоть до дальнейшего использования.

Производственные культуры продуцента получают, выращивая посевной материал микроорганизмов как на поверхности твердых или жидких сред, так и в гл ине жидких питательных сред. [c.76]

    Такие сельскохозяйственные культуры, как кормовые злаки, кукуруза и люцерна, широко используются в качестве корма для скота, поэтому очень важно обеспечить правильные условия их хранения в течение многих месяцев.

Традиционно для этого применяют природные молочнокислые бактерии, для которьгх растительный материал служит субстратом при синтезе молочной и уксусной кислот. Эти кислоты подавляют рост других микроорганизмов, способствуя сохранению кормовой растительной массы (силоса).

Если молочнокислые бактерии присутствуют на свежем растительном материале в небольшом количестве, нужно добавить бактериальный посевной материал (обычно La toba illus plantanim).

К сожалению, эта мера оказывается малоэффективной в том случае, когда растительная культура содержит недостаточное для поддержания роста бактерий и производства молочной кислоты количество водорастворимых углеводов. [c.294]

    Кожухотрубные бесскребковые конденсаторы применены также в установке для сушки фосфоробактерина [3]. Бактериальные удобрения, такие, как фосфоробактерин, азотобактерин и нитрагин, представляют собой микроорганизмы, способствующие усвоению питательных веществ растениями. Их применение приводит к резкому повышению урожайности сельскохозяйственных культур.

В то же время хранение и перевозка этих удобрений в жидком виде весьма нерациональна, так как они могут храниться без изменения свойств в течение только примерно 3 мес. Неудивительно, что годовая экономия при переходе на выпуск сухого фосфоробактерина на Московском заводе минеральных удобрений составляет около 2—2,5 млн. руб.. (в ценах 1960 года). [c.

294]

    Так как солод и другие зерновые культуры могут быть контаминированы различными микроорганизмами (дрожжами и бактериями), брожение виски начинается с внесения в сусло известной культуры дрожжей (обычно определенного высокопродуктивного штамма, используемого для дистилляции) [81, 82] о штаммах дрожжей см.

[40]. Для обеспечения требуемого состава и вкусо-ароматических характеристик дистиллята дрожжи иногда могут подбирать специально (особенно это касается состава сложных эфиров) [44]. На продуктивность дрожжей влияют также способы их культивирования и условия хранения [47].

В некоторых случаях (особенно при производстве шотландского виски) для брожения могут использоваться пивоваренные дрожжи считается, что они способствуют получению дистиллята с более подходящими вкусо-ароматическими характеристиками [40].

Выход продукта можно увеличить путем использования дрожжей, продуцирующих глюкоамилазу [39]. [c.309]

    Повторное выделение чистых культур из природных источников в ряде случаев представляет серьезные трудности.

Многие микроорганизмы при неправильном хранении могут в значительной мере или даже полностью утратить способность трансформировать стероиды. В связи с этим важное ваучное и практическое значение приобретает проблема сохранения культур микроорганизмов.

Все известные методы хранения сводятся к переводу культур в анабиотическое состояние. С этой целью микроорганизмы [c.39]

    Микробиология пищевых продуктов. Задачей некоторых научных учреждений является общий и санитарный микробиологический контроль сырья и пищевых продуктов.

Определяется степень бактериального загрязнения нищи и изолируются чистые культуры микроорганизмов, которые далее подвергаются исследованиям и идентификации.

Подробно оцепивается их зпачепио в хранении пищевых продуктов. [c.62]

    Вместе с тем важность проблемы длительного сохранения культур очевидна коллекции микрооргапизмов, в том числе и водорослей, созданные в ряде стран, нуждаются для поддержания жизнеспособности в довольно частых нересевах.

Это связано не только с затратами труда, но и нередко приводит к изменепию культуральных свойств штаммов. Одной из причин может быть то обстоятельство, что питательные среды не являются строго постоянными по своим физико-химическим свойствам (Колесов, 1952).

При пересевах могут изменяться морфологические и физиологические свойства микроорганизмов (Имшенецкий, 1952 Krassilinikov, 1963). Эти изменения, естественно, обесценивают коллекционные культуры (Данилова, Надирова, Кудрявцев, 1967).

Отсутствие мутационных изменений наряду с соответствующим уравнением выживаемости и необходимой частотой пересевов может быть критерием пригодности того или иного метода (Овсянникова, 1971). В целом методы хранения коллекционных культур [c.208]

    Таким образом, на основании проведенной работы можно заключить, что использованные штаммы водорослей могут быть с успехом лиофилизи-рованы в защитных средах Серышевой и Файбича (СЖА), применяемых для других микроорганизмов.

Добавление 10% глицерина к защитным средам значительно повышает процент жизнеспособных клеток в суспензии при учете вскоре после высушивания. При увеличении срока хранения этот эффект нивелируется.

Сепарированное молока без добавок не способствует успешному проведению лиофилизации, но в соединении с глюкозой оно таюке может являться защитной средой при лиофилизации водорослей. С течением времени (через полтора года) количество живых клеток в лиофилизированном материале при всех испытанных нами защитных средах падает.

Тем не менее клеток, сохранивших жизнеспособность до года и более, вполне достаточно для нолучения исходной культуры. Каковы же биологические показатели культур, хранившихся в лио-фильно-высушенном состоянии, полученные яз небольшого процента со- [c.215]

    Наилучшая форма сохранения организмов, при которой не теряется антибиотическая активность, — их лиофилизация. Метод пригоден как для спорообразующих, так и для бесспоровых культур микроорганизмов.

Сущность метода состоит в том, что суспензия клеток или спор микроорганизма, приготовленная на среде, богатой белками (часто используется кровяная сыворотка), быстро замораживается при температуре от -40 до -60 °С и высушивается под вакуумом до остаточной влажности (0,5-0,7%). После такой обработки ампулы со спорами или клетками лио-филизированного микроба запаивают.

Лиофилизированные бактерии сохраняются 16-18 лет, споры грибов не теряют основных свойств при хранении их в лиофилизированном виде в течение Шлет. [c.155]

    Пересевы культур микроорганизмов (главным образом асно-рогенных) проводятся на свежие питательные среды один-два раза в месяц (иногда еженедельно) снорогенные бактерии, актиномицеты, дрожжи и мицелиальные грибы пересевают через два-три месяца.

Время инкубации до начала хранения не должно превышать периода экспоненциального роста культуры. Как правило, культуры, находящиеся в начале стационарной фазы роста, лучше переносят условия хранения.

Частые пересевы, особенно на жидкие среды, вызывают изменение свойств, способствуют возникновению спонтанных мутантов, которые могут снижать активность продуцентов биологически валплотной среде (если они на ней растут).

Для предотвращения возможных изменений в популяции лучше приготовить серию субкультур, полученных из одной родительской культуры. Микроорганизмы между пересевами хранят в темноте при температуре от 5 до 20 °С. [c.150]

Источник: https://www.chem21.info/info/185610/

Методы хранения культур микроорганизмов

Методические рекомендации по хранению культур микроорганизмов в

ХАНТЫ-МАНСИЙСКИЙ АВТОНОМНЫЙ ОКРУГ – ЮГРА

СУРГУТСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ 

Биологический факультет

Кафедра микробиологии        

КУРСОВАЯ РАБОТА  

Тема  «Методы хранения культур микроорганизмов.»                 

Выполнила: студентка 05-56 группы III курса

Биологического факультета

Литвиченко 

Виктория 

Сергеевна.

Проверил:

преподаватель

Ямпольская Татьяна Даниловна.       

Сургут – 2008

Оглавление. 

Введение – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – 3

Глава 1. Хранение микроорганизмов- – – – – – – – – – – – – – – – -4

1.1 Периодические пересевы на питательные среды- – – – – -4

1.2.Хранение под минеральным маслом- – – – – – – – – – – – – –  4

1.3 Хранение в лиофилизированном состоянии- – – – – – – – – 5

1.4.Хранение при низких и сверхнизких температурах- – – -6

1.5.Хранение в глицероле- – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – -7

1.6.Хранение в дистиллированной воде или

       1%-ном растворе хлорида натрия- – – – – – – – – – – – – – – – 7

1.7.Хранение в высушенном состоянии на адсорбентах- – – 8

1.8.Оценка жизнеспособности микроорганизмов

       после длительного хранения- – – – – – – – – – – – – – – – – – – 8

Глава 2. Экспериментальные часть.- – – – – – – – – – – – – – –  9

2.1 Методы длительного хранения коллекции

       микроорганизмов кафедры  микробиологии МГУ- – – – 9

2.2 Сравнение способов хранения молочнокислых 

       Бактерий- – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – 16

Заключение- – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – 23

Список литературы- – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – – -24              

Введение 

      Необходимым условием успешной работы с микроорганизмами является правильное поддержание их с целью сохранения не только жизнеспособности клеток, но и таксономических, а также любых других, важных для исследователя свойств.

Общего метода, одинаково пригодного для хранения многочисленных и разнообразных групп микроорганизмов, пока не существует. Поэтому в крупных коллекциях разные группы микроорганизмов сохраняются различными методами.

Кроме того, чтобы исключить возможность потери микроорганизма, каждый штамм сохраняется не одним, а несколькими способами.                             

Глава 1. ХРАНЕНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ 

      К числу наиболее распространенных способов хранения микроорганизмов относятся периодические пересевы на свежие питательные среды, сохранение культур на питательной среде под вазелиновым маслом, хранение клеток в лиофилизированном состоянии.

Значительно реже микроорганизмы сохраняют при низких или сверхнизких температурах, в дистиллированной воде или 1%-ном растворе хлористого натрия, на адсорбентах в высушенном состоянии.

Выбор метода хранения во многом зависит от целей, для которых используются микроорганизмы, а также от имеющегося в распоряжении исследователя оборудования.

1.1 Периодические пересевы на питательные среды. Этот способ был одним из первых приемов длительного сохранения микроорганизмов в лабораторных условиях и до настоящего времени широко используется в практике микробиологических работ.

Аэробные микроорганизмы пересевают чаще всего на поверхность скошенной агаризованной среды, микроаэрофилы — в полужидкую среду, содержащую 0,2—0,3% агара, анаэробы — в толщу плотной среды или в жидкую среду. Культуры пересевают на свежие среды в 2 пробирки (колбы).

В дальнейшем из одной пробирки микроорганизмы используют для работы, культуру во второй пробирке оставляют для сохранения и последующего пересева.

      Частота пересева на свежую среду различных микроорганизмов неодинакова и в большой степени определяется их свойствами.

Многие микроорганизмы можно пересевать один раз в 1—2 месяца, хотя есть микроорганизмы, например молочнокислые бактерии, которые нуждаются в более частых пересевах.

Допустимые сроки пересевов некоторых микроорганизмов приведены в Приложении. Хранение культур в холодильнике при 4—6° позволяет увеличить время между пересевами.

Поддержание культур микроорганизмов регулярными пересевами имеет ряд существенных недостатков. Основной из них — возможная утрата некоторых морфологических и физиологических признаков.

Кроме того, частые пересевы нередко снижают биохимическую активность культур, повышают опасность инфицирования ее посторонними микроорганизмами.

При частых пересевах, особенно на жидкие среды, велика вероятность возникновения спонтанных мутантов и их селекция.

1.2.Хранение под минеральным маслом. Хранение под минеральным маслом широко используется для бактерий и микроскопических грибов.

Этот метод обеспечивает довольно длительное сохранение жизнеспособности и стабильности таксономических и других признаков у микроорганизмов различных систематических групп.

Масло предотвращает высыхание среды, замедляет процессы метаболизма и позволяет увеличить время между пересевами.

Микроорганизмы выращивают на благоприятной агаризованной питательной среде; аэробные микроорганизмы — на поверхности коротко скошенной (под углом 45°) среды, микроаэрофилы и факультативные анаэробы — в полужидкой среде, анаэробы — в толще .среды (посев уколом или в расплавленную среду с перемешиванием).

После того как культуры хорошо разовьются, их заливают маслом. Как правило, аспорогенные бактерии заливают через 2—7 суток после посева в зависимости от скорости роста микроорганизма, бациллы и актинонимицеты — в стадии сформировавшихся покоящихся форм.

Дрожжи рекомендуется заливать маслом через 4—10, мицелиальные грибы — через 7—12 суток.

Наиболее пригодно для заливки культур микроорганизмов высокоочищенное медицинское вазелиновое масло с плотностью 0,8—0,9.

Предварительно масло стерилизуют 1 ч в автоклаве при 121° (1 ати), а затем для удаления влаги прогревают в течение 1 ч в сушильном шкафу при температуре не выше 150° или оставляют на двое – трое суток при комнатной температуре.

Культуры заливают маслом так, чтобы слой его не превышал 1 см над средой или верхним краем скошенной среды, и сохраняют при комнатной температуре либо в холодильнике при 4—6°.

      Для пересева клетки из-под масла отбирают петлей и, удалив излишек масла проведением петли по стенке пробирки, переносят на свежую питательную среду. Рекомендуется использовать среду того же состава, на которой культуру хранили. Многие микроорганизмы в первом пассаже после хранения под маслом развиваются медленнее, однако при последующих пересевах скорость роста их восстанавливается.

Метод хранения микроорганизмов под вазелиновым маслом прост, удобен в обращении, может быть использован в любой лаборатории. К недостаткам его можно отнести возможность инфицирования помещения микроорганизмами за счет разбрызгивания масла при обжигании петли, а также необходимость специальной очистки посуды от масла.

1.3 Хранение в лиофилизированном состоянии. Хранение лиофильно – высушенных клеток — широко распространенный метод длительного сохранения микроорганизмов. Лиофилизацией называют процесс высушивания под вакуумом замороженных клеток.

Лиофильно-высушенные клетки сохраняют в ампулах, запаянных под вакуумом.

Применение этого метода позволяет в течение 10—20 и более лет сохранить без заметных изменений жизнеспособность, морфологические, культуральные, физиологические свойства, а также биохимическую активность клеток.

Микроорганизмы, подлежащие лиофилизации, выращивают в оптимальных условиях до начала стационарной фазы роста или окончания формирования покоящихся форм.

Затем клетки или соответственно покоящиеся формы суспендируют в специальных жидкостях, получивших название защитных сред. В состав защитных сред входят различные вещества, которые предохраняют клетки от повреждений в период замораживания и высушивания.

11иже приведены рецепты некоторых защитных сред, используемых для лиофилизации клеток различных микроорганизмов:

1.  Желатина                          — 1 г;

сахароза                                — 10 г;

вода дистиллированная         — 100 мл.

2. Молоко обезжиренное       — 100 мл;

глюкоза                                 — 7 г.

3.  Молоко обезжиренное       — 100 мл;

NH4C1                                   — 0,5 г;

аскорбиновая, кислота            — 0,5 г;

 тиомочевина                           — 0,5 г.

4.  Лошадиная сыворотка        — 75 мл;

мясной бульон                       — 25 мл;

глюкоза                                      — 7,5 г. 

      Для успешной лиофилизации плотность в защитной среде должна быть как можно более высокой — 109—1010 клеток в 1 мл. Полученную суспензию разливают в ампулы из нейтрального стекла по 0,5—1,0 мл, замораживают при температуре от —20 до —70°, затем высушивают и запаивают под вакуумом.

Остаточная влажность лиофилизированных клеток колеблется от 1 до 6% и определяется составом защитной среды и режимом высушивания. В различных лабораториях режимы замораживания и высушивания заметно варьируются и во многом зависят от имеющегося оборудования. Ампулы с лиофильно-высушениыми клетками рекомендуется сохранять в темноте при температуре 4—6°.

Хранение при более высокой температуре, особенно превышающей 25—30°, заметно снижает выживаемость клеток.

Для реактивации к лиофилизированным клеткам добавляют по каплям стерильную дистиллированную или водопроводную воду в количестве 0,5—1,0 мл. После регидратации клетки высевают на богатые питательные среды.

Лиофилизацию широко применяют для длительного хранения различных микроорганизмов. Тем не менее этот метод нельзя считать универсальным. Следует отметить, что к лиофилизации более устойчивы грамположительные, чем грамотрицательные бактерии.

Очень плохо переносят ее фототрофные и хемолитотрофные бактерии, микоплазмы, многие облигатные анаэробы. Выживаемость спор после лиофилизации заметно выше, чем вегетативных клеток.

Дрожжи с мелкими клетками и аскоспорами родов Pichia и Hansenula выдерживают лиофилизацию лучше, чем слабоспорулирующие или неспорулирующие крупные клетки дрожжей родов Sacchawmyces, Kluyveromyces, Rhodotorula.

1.4.Хранение при низких и сверхнизких температурах.

Хранение микроорганизмов в замороженном состоянии при низких и сверхнизких температурах по сравнению с другими методами характеризуется наибольшей универсальностью.

Однако этот метод требует специального оборудования и большой осторожности в работе с жидким азотом, поэтому используется лишь для сохранения микроорганизмов, не выдерживающих лиофилизацию.

Клетки замораживают при разных температурах (от —10 до — 196°) и различных скоростях замораживания. Для защиты от повреждающего действия низких температур клетки предварительно суспендируют в растворах криопротекторов. Чаще других применяют 10—20%-ный раствор глицерина, 7—10%-ный раствор диметилсульфоксида или 20%-ный раствор сахарозы.

Суспензию клеток с высокой плотностью (109—1010 клеток в 1 мл) разливают в ампулы или флаконы с завинчивающейся крышкой. Ампулы запаивают и помещают в холодильник с температурой —70°, а затем переносят в жидкий азот, где и. сохраняют при —196°. Оттаивание замороженных клеток должно быть как можно более быстрым. Поэтому ампулы погружают на 2 мин в водяную баню с температурой 35—45°.

Клетки из ампул высеивают на богатые питательные среды.

Источник: https://student.zoomru.ru/bio/metody-hraneniya-kultur-mikroorganizmov/150212.1158192.s1.html

4. Методы хранения культур микроорганизмов

Методические рекомендации по хранению культур микроорганизмов в

Основные задачихранения культур: поддержание ихжизнеспособности, сохранение стабильноститаксономически важных признаков, атакже любых других определенных свойств,представляющих интерес для науки ипрактики.

В коллекцияхжизнеспособность микроорганизмовподдерживается преимущественноследующими методами: 1) периодическимипересевами (субкультивирование); 2) подминеральным маслом; 3) высушиванием; 4)лиофилизацией; 5) в условиях низких иультранизких температур.

Субкультивирование– традиционный метод хранения культур(чаще всего аспорогенных) и заключаетсяон в пересевах культур на свежиепитательные среды один-два раза в месяц.

Между пересевами микроорганизмы хранятв темноте при температурах 5 – 20 °С.

Прииспользовании этого метода хранениякультур должны быть соблюденытри условия:1) подходящая поддерживающая среда; 2)идеальная температура хранения; 3)необходимая частота пересевов.

Преимуществомметодаявляется простота и удобный визуальныйконтроль за чистотой культуры или ееморфологической изменчивостью, а кнедостаткамследуетотнести возможность заражения,краткосрочность хранения, трудоемкостьработы и большой расход реактивов.

Хранение подминеральным масломзаключается в следующем: культурумикроорганизмов выращивают наблагоприятной агаризованной питательнойсреде и заливают стерильным вазелиновыммаслом.

Слой масла (0,5 – 1,0 см) замедляетскорость обменных процессов микроорганизмови предохраняет поверхность среды отвысыхания. Покрытые маслом культурыхранят в холодильнике.

Большинствосапрофитных бактерий сохраняютжизнеспособность в течение 8 – 14 лет,дрожжи и мицелиальные грибы пересеваютчерез 2 – 3 года.

Хранение под масломимеет следующиепреимущества:относительно длительное сохранениестабильности свойств микроорганизмов,сокращение затрат на пересевы, возможностьиспользования в любой микробиологическойлаборатории. Недостатокметода –слабая разработанность протоколов длямногих групп бактерий.

Высушивание– простейший метод хранения микроорганизмов,в процессе которого происходитобезвоживание микробных клеток. Ввысушенных (до остаточной влажности 10– 12 %) клетках биохимические реакцииприостанавливаются или протекают оченьмедленно. Процесс высушивания лучшевсего переносят спорообразующие виды.

Широко применяют воздушное высушиваниемикроорганизмов на различных адсорбентах:в стерильной почве, песке, глине,фильтровальной бумаге, стеклянныхбусах, крахмале и т. д. Адсорбенты защищаютмикроорганизмы от сильного высыхания,связывают свободную воду и поддерживаютопределенный уровень влажности.

Разновидностью метода являетсяL-высушивание:микроорганизмы в суспензионной средевысушивают под вакуумом в стеклянныхампулах, погруженных в водяную баню сконтролируемой температурой.

Преимуществаметода.Высушенные культуры микроорганизмовлегко хранить и транспортировать, онишироко используются для храненияхлебопекарных и кормовых дрожжей,бактериальных удобрений (нитрагин,азотобактерин), энтомопатогенныхпрепаратов.

Лиофилизациязаключаетсяв удалении воды из замороженных суспензийпод вакуумом, т. е. при этом вода испаряется,минуя жидкую фазу.

Выживаемостьлиофилизированных клеток зависит отспецифических особенностей вида иштамма, стадии роста и концентрацииклеток, состава защитных сред, режималиофилизации, условий реактивации.

После лиофилизации для выведения клетокиз состояния анабиоза создают условия,снижающие осмотический шок и стресс,возникающий при вскрытии ампул. Лучшевсего восстановление свойств происходитна богатых натуральных средах.

Преимуществаметода. Этотметод считается одним из самых экономичныхи эффективных методов длительногохранения микроорганизмов. При егоиспользовании многие разнородные группыбактерий и бактериофагов сохраняютсяв жизнеспособном состоянии 30 и болеелет. Недостатокметода –сложная и недостаточно разработаннаятехнология способа хранения, требуетсяспециальное оборудование.

Хранениемикроорганизмов при низких и ультранизкихтемпературахиспользуется в тех случаях, когдакультуры не выдерживают лиофилизации(некоторые автотрофные бактерии,спирохеты, микоплазмы, водные фикомицеты,различные вирусы).

Микроорганизмызамораживают либо в рефрижераторах (от– 12 °С до – 80 °С) либо используютрефрижераторы с азотом: газово-фазовый(– 150 °С) или жидко-фазовый (– 196 °С).Считается, что грамположительныебактерии более устойчивы к замораживанию,чем грамотрицательные.

Чтобы оживитьзамороженные культуры, их быстрооттаивают при 37 °С.

Преимуществакриогенного сохранения микроорганизмов:малая вероятность заражения культуры,сохранение в стабильном состоянии свойств микроорганизмов, небольшиевременные и материальные затраты,возможность использования замороженныхкультур в качестве прямого инокулята. Недостаток метода – сложная и недостаточноразработанная технология способахранения, требуется специальноеоборудование.

Источник: https://studfile.net/preview/5244879/page:3/

Medic-studio
Добавить комментарий