Нарушения рецептивности эндометрия у больных тяжелыми формами

Способ восстановления рецептивности эндометрия у женщин с маточной формой бесплодия с использованием кавитированного раствора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора роста

Нарушения рецептивности эндометрия у больных тяжелыми формами

Способ восстановления рецептивности эндометрия у женщин с маточной формой бесплодия с использованием кавитированного раствора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора роста.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и представляет собой метод восстановления рецептивности эндометрия при маточной форме бесплодия с целью увеличения имплантационного потенциала эндометрия и частоты наступления беременности.

Известно устройство для местного лечения воспалительных заболеваний полости матки (Патент на полезную модель №125853, опубл. 20.03.2013 г.). Устройство содержит ультразвуковой генератор, акустический узел, волновод-инструмент с защитным кожухом, инфузионную систему для подачи лекарственного раствора.

Для осуществления способа через цервикальный канал в полость матки вводят волновод-инструмент в защитном кожухе. С помощью регулятора инфузионной системы устанавливают струйную подачу лекарственного раствора в ирригационный канал ультразвукового инструмента.

Осуществляют запуск ультразвуковых колебаний и производят обработку полости матки «озвученным» лекарственным раствором. Воздействие осуществляют в течение 3-5 мин при частоте ультразвуковых колебаний 25 кГц, скорости инфузии около 100-150 мл/мин.

В процессе ультразвуковой обработки обеспечивается постоянный отток содержимого из полости матки.

Недостатками способа являются заявленные показания, которые касаются исключительно воспалительного процесса в полости матки, отсутствие указаний на лекарственные препараты, используемые для орошения матки, дни менструального цикла при применении процедуры. Не описаны пролиферативные эффекты процедуры в отношении эндометрия, которые позволяют использовать ее при гипоплазии слизистой полости матки.

Известен способ лечения хронического эндометрита (Патент на изобретение №2342173, опубл. 27.12.2008 г.).

При реализации способа проводят внутриматочное введение 100 ME Полудана®, растворенного в 5 мл стерильного раствора для инъекций с одновременным озвучиванием эндометрия в течение 60 мин низкочастотным ультразвуком.

Способ лечения осуществляют на 5-7 день цикла утром через 1,5-2 часа после еды, всего проводят 5 процедур.

Недостатками способа являются большая продолжительность процедуры (60 мин), сложность в ее проведении с соблюдением всех условий, а также многокомпонентность лечебного средства (Полудан®: калия полирибоаденилат, калия полирибоуридилат). Кроме того, данный способ применяется для лечения хронического эндометрита и основной его задачей является санация полости матки за счет местного иммуномодулирующего эффекта.

Из патента на изобретение №2591086, опубл. 10.07.2016 г. известна «Предимплантационная подготовка к программе ЭКО пациенток при гипоплазии эндометрия и снижении овариального резерва после оперированного наружного генитального эндометриоза».

При гипоплазии эндометрия 7 мм и меньше, уровне тестостерона в крови менее 1 нмоль/л назначают андриол перорально в дозе 40 мг в сутки на протяжении 2-3 мес до проведения программы ЭКО и продолжают в программе ЭКО до пункции фолликулов, дополнительно с 5 по 7 дни лечебного цикла проводят внутриматочную инсталляцию филграстима в дозе 100 мкг и инстиллагеля с использованием катетера Фолея. Способ позволяет повысить эффективность программ ЭКО и лечения бесплодия, осложненного снижением овариального резерва вследствие оперированного НГЭ и гипоплазией эндометрия.

Недостатком способа является длительное (7 дней) использование внутриматочного катетера Фолея для введения препаратов, связанное с дополнительным риском инфицирования матки и болевыми ощущениями, снижающими качество жизни женщины.

Впервые внутриматочное введение гранулоцитарного колонестимулирующего фактора (G-CSF) для лечения рефрактерного тонкого эндометрия предпринято Cleicher N, Vidali A.

, Barad DH, 2011, Center of Human Reproduction and the Foundation for Reproductive Medicine, New York [1].

У 4 пациенток с тонким эндометрием, не имевших успеха от гормонального лечения и вазодилататоров, полость матки была промыта однократно 1 мл Г-КСФ 30 MU накануне переноса эмбриона в программах ВРТ. Во всех случаях наблюдалось увеличение толщины эндометрия.

Способ не позволяет добиться абсорбции препарата в базальный слой эндометрия, являющийся основной точкой приложения действия филграстима (G-CSF). В базальном слое расположены стволовые унипотентные эндометриальные клетки, обеспечивающие его регенерацию и пролиферацию – Timeva Т, Shterev A, Kyurkchiev S.

Recurrent Implantation Failure: The Role of the Endometrium. J Reprod Infertil. 2014 Oct-Dec; 15(4): 173-183. PMID:25473625 PMCID: PMC4227974 [2]; Gardner DK, Lane M. Mammalian preimplantation embryo culture. Methods Mol Biol. 2014; 1092:167-82. Epub 2013/12/10. doi: 10.1007/978-1-60327-292-6-11 [3].

Это снижает биодоступность действующего вещества при внутриматочном введении препарата. Эндометрий обладает низкой абсорбционной способностью, поскольку в его функциональном слое отсутствуют лимфатические сосуды – Jerman LF, Hey-Cunningham AJ.

The role of the lymphatic system in endometriosis: a comprehensive review of the literature. Biol Reprod. 2015 Mar; 92(3):64. doi: 10.1095/biolreprod. 114.124313. Review [4]; Koukourakis MI, Giatromanolaki A, Sivridis E, Simopoulos C, Gatter KC, Harris AL, Jackson DG.

LYVE-1 immunohistochemical assessment of lymphangiogenesis in endometrial and lung cancer. J Clin Pathol. 2015 Feb; 58(2):202-6 [5].

В качестве ближайшего аналога (прототипа) изобретения нами выбран способ лечения бесплодия на фоне хронического эндометрита с гипоплазией эндометрия [Патент на изобретение №2571236, опубл. 20.12.2015 г.].

Способ включает комплексную терапию, в составе которой проводят внутриматочное введение лекарственных растворов с воздействием на эндометрий низкочастотного ультразвука (НЧУЗ).

Процедуры НЧУЗ обработки проводят в три курса: в первом курсе для НЧУЗ обработки полости матки используют 0,05% водный раствор хлоргексидина. Во втором и третьем курсе используют раствор иммунофана на стерильном физиологическом растворе в соотношении 1/125.

При этом в курсе лечения процедуры проводят один раз в день, ежедневно, при количестве процедур от 5 до 10. Между курсами лечения делают перерыв, равный 2-3 менструальным циклам. Начало проведения процедур в курсе – 5-9 день менструального цикла.

Данный метод используется только для лечения гипоплазии эндометрия, обусловленной хроническим эндометритом, и не учитывает клинические ситуации рефрактерного эндометрия в отсутствие воспалительного процесса, например, обусловленные фиброзом и склерозом стромы, либо истиной гипоплазией стромальных структур эндометрия и его базальной зоны. Кроме того, недостатком метода является его применение в первую фазу менструального цикла, не учитывая период «окна имплантации». Хлоргексидин, применяющийся в качестве озвученной среды, обладает токсичным действием.

Задачей заявляемого изобретения является разработка способа восстановления рецептивности и повышения имплантационного потенциала эндометрия при маточной форме бесплодия, обусловленной гипоплазией эндометрия.

Технический результат: способ позволяет добиться абсорбции препарата в базальный слой эндометрия, являющийся основной точкой приложения действия гранулоцитарного колониестимулирующего фактора роста.

В базальном слое расположены стволовые унипотентные эндометриальные клетки, обеспечивающие его регенерацию и пролиферацию.

Метод повышает биодоступность действующего вещества при внутриматочном введении препарата.

Заявляется способ повышения рецептивности эндометрия у пациенток с маточной формой бесплодия при наличии тонкого рефрактерного эндометрия при подготовке к проведению экстракорпорального оплодотворения, отличающийся тем, что в период имплантационного окна на 7-й день после овуляции при 28-дневном менструальном цикле, предшествующем проведению экстракорпорального оплодотворения, проводят процедуру низкочастотного ультразвукового кавитационного орошения полости матки, при которой в качестве озвученной лекарственной среды применяют препарат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора роста Filgrastim® в дозе 300 мкг/мл в разведении 6 мл препарата на 200 мл 5% раствора декстрозы, длительность процедуры 5 мин, частота ультразвуковых волн 25 кГц.

Способ осуществляется следующим образом.

Сущность способа заключается в проведении на седьмой день после овуляции процедуры кавитационного орошения полости матки лекарственным раствором гранулоцитарного колониестимулирующего фактора роста Filgrastim®, предварительно озвученным ультразвуком низкой частоты.

Низкочастотный ультразвук благодаря физическому эффекту кавитации в жидкой среде используется в качестве транспорта лекарственного вещества в ткани за счет фонофоретического действия in vivo.

Гранулоцитарный колонестимулирующий фактор активирует дифференцировку полипотентных стволовых клеток эндометрия и их пролиферацию, стимулирует высвобождение ангиогенных факторов роста CD95+ клетками – Cleicher N, Vidali A., Barad D.H.

Successful treatment of unreceptive thin endometrium. Fertill Sterill, 2011, May; 95(6): 2123 e13-7; doi 10.1016/j.fernsteril.2011.01.143 [1].

Кавитированные растворы обладают выраженным фонофоретическим эффектом в тканях, что способствует достижению оптимальной глубины проникновения препарата в область базальной мембраны, где Filgrastim® оказывает пролиферативный эффект.

Способ используется в период «имплантационного окна» на 7 день после овуляции (ЛГ+7) при 28-дневном менструальном цикле, что соответствует периоду «окна имплантации».

Ультразвуковое низкочастотное орошение полости матки производится за один менструальный цикл до процедуры проведения вспомогательных репродуктивных технологий в рамках подготовки эндометрия к успешной имплантации эмбриона.

В качестве озвученной среды применяется 6 мл препарата Filgrastim® в дозе 300 мкг/мл в разведении на 200 мл 5% раствора декстрозы. Доза препарата Filgrastim® в приготовленном растворе составляет 3 мкг/мл.

Для проведения орошения используется аппарат «Фотек АК-100-25» с усовершенствованным внутриматочным наконечником АА 211. Скорость инфузии лекарственного препарата 100 мл/мин. Частота ультразвуковых колебаний 25 кГц, длительность процедуры 3-5 мин. Проводится одна процедура.

Клинические примеры:

Пример 1. Пациентка К. 36 лет, страдает вторичным бесплодием в течение 9 лет. В анамнезе два медицинских аборта по желанию пациентки. Б-2, Р-О, А-2, Н-0. Менархе с 17 лет, цикл 27 дней, регулярный, продолжительностью 2-3 дня, характер менструаций скудный. Соматическое отягощение хроническим гастритом.

Гинекологические заболеваний: хронический аднексит, синехии полости матки. В 2012 году выполнена гистерорезектоскопия, рассечение тонких синехий в полости матки. В 2015 году – лапароскопия, двухсторонняя тубэктомия по поводу двухсторонних гидросальпинксов.

В 2015 году выполнена первая попытка ЭКО, без эффекта.

При обследовании М-ЭХО 4,0 мм на 20 день менструального цикла (м.ц).

Проведена процедура низкочастотного ультразвукового кавитационного орошения полости матки препаратом Filgrastim® на 20 день цикла (ЛГ+7) объемом 6 мл в разведении 200 мл 5% раствора декстрозы длительностью 5 мин, частотой ультразвуковых колебаний 25 кГц.

В следующем менструальном цикле проводилась стимуляция овуляции в протоколе ВРТ, в день переноса эмбриона М-ЭХО составило 11 мм. В полость матки был перенесен 1 эмбрион. Успешно наступила одноплодная беременность. Вынашивает беременность.

Пример 2. Пациентка Ш. 31 год, страдает вторичным бесплодием в течение 6 лет. В анамнезе медицинский аборт по желанию пациентки. Б-1, А-1, Н-0 Р-0. Менархе с 13 лет, цикл 28 дней, регулярный, продолжительность менструаций 3-4 дня, характер менструаций скудный. Соматическое отягощение субклиническим гипотиреозом, хроническим пиелонефритом.

Гинекологические заболевания: уреаплазмоз, пароавариальная киста слева, полип эндометрия. 2013 год – гистероскопия, полипэктомия. 2015 год – лапароскопия, удаление параовариальной кисты слева. Исходно М-ЭХО на 22 день м.ц. 3 мм. Проведено 3 курса кавитационного орошения полости матки физиологическим раствором в первую фазу менструального цикла (7-9 день цикла).

М-ЭХО на 21 день м.ц. составил 7 мм. Проведена первая попытка ЭКО, без эффекта. Выполнена криоконсервация 4 эмбрионов. Следующим этапом проводилось одна процедура низкочастотного орошения полости матки препаратом Filgrastim® на 20 день цикла (ЛГ+7) объемом 6 мл в разведении 200 мл 5% раствора декстрозы в течение 5 мин.

В следующем менструальном цикле выполнен перенос двух размороженных эмбрионов в полость матки в цикле с заместительной гормональной терапией, при этом М-ЭХО на момент эмбриотрансфера составил эмбриона 8,5 мм.

Наступила одноплодная беременность, которая завершилась преждевременными оперативными родами в сроке беременности 32-33 недели в связи с субкомпенсированной фето-плацентарной недостаточностью на фоне умеренной преэклампсии. Ребенок растет и развивается по возрасту.

Пример 3. Пациентка Ж., 34 лет. В анамнезе привычное невынашивание (2 неразвивающиеся беременности), после которого сформировалось вторичное бесплодие. Б-2, Н-2, А-0, Р-0. Менархе с 12 лет, цикл 28 дней, регулярный, продолжительность менструаций 4 дня, характер – скудный.

Соматически отягощена генетической тромбофилией. Гинекологические заболевания – синехии полости матки. В 2014 году выполнена гистерорезектоскопия, рассечение синехий в полости матки. В 2015 году ЭКО, без эффекта. Исходно М-ЭХО 4,2 мм на 20 день м.ц.

Проведено два курса низкочастотного ультразвукового орошения полости матки физиологическим раствором в первую фазу менструального цикла. М-ЭХО составил 7,2 мм.

В качестве подготовки эндометрия к процедуре ЭКО за один цикл было проведено орошение полости матки во вторую фазу цикла на 7 день после овуляции препаратом Filgrastim® объемом 6 мл в разведении 200 мл 5% раствора декстрозы длительностью 5 мин, частотой 25 кГц.

В следующем менструальном цикле проведен криоперенос 1 эмбриона, прошедшего предимплантационную генетическую диагностику. М-ЭХО на день переноса составило 10,4 мм. Наступила одноплодная беременность. Женщина самостоятельно родоразрешилась в сроке беременности 39 недель. Ребенок растет и развивается по возрасту.

Таким образом, метод применения препарата Filgrastim® в качестве озвученной среды при проведении ультразвукового кавитационного орошения полости матки на седьмой день после овуляции в менструальном цикле, предшествующем проведению протокола ВРТ, является эффективной технологией лечения рефрактерного тонкого эндометрия и повышения частоты наступления беременности при проведении ВРТ.

Источники информации

1. Cleicher N, Vidali A., Barad D.H. Successful treatment of unreceptive thin endometrium. Fertill Sterill, 2011, May; 95(6): 2123 e13-7; doi 10.1016/j.fernsteril.2011.01.143.

2. Timeva T, Shterev A, Kyurkchiev S. Recurrent Implantation Failure: The Role of the Endometrium. J Reprod Infertil. 2014 Oct-Dec; 15(4): 173-183. PMID: 25473625 PMCID: PMC4227974.

3. Gardner DK, Lane M. Mammalian preimplantation embryo culture. Methods Mol Biol. 2014; 1092:167-82. Epub 2013/12/10. doi: 10.1007/978-1-60327-292-6-11.

4. Jerman LF, Hey-Cunningham AJ. The role of the lymphatic system in endometriosis: a comprehensive review of the literature. Biol Reprod. 2015 Mar; 92(3):64. doi: 10.1095/biolreprod.114.124313. Review.

5. Koukourakis MI, Giatromanolaki A, Sivridis E, Simopoulos C, Gatter KC, Harris AL, Jackson DG. LYVE-1 immunohistochemical assessment of lymphangiogenesis in endometrial and lung cancer. J Clin Pathol. 2015 Feb; 58(2):202-6.

Способ повышения рецептивности эндометрия у пациенток с маточной формой бесплодия при наличии тонкого рефрактерного эндометрия при подготовке к проведению экстракорпорального оплодотворения, отличающийся тем, что в период имплантационного окна на 7-й день после овуляции при 28-дневном менструальном цикле, предшествующем проведению экстракорпорального оплодотворения, проводят процедуру низкочастотного ультразвукового кавитационного орошения полости матки, при которой в качестве озвученной лекарственной среды применяют препарат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора роста Filgrastim в дозе 300 мкг/мл в разведении 6 мл препарата на 200 мл 5%-ного раствора декстрозы, длительность процедуры 5 мин, частота ультразвуковых волн 25 кГц.

Источник: https://edrid.ru/rid/218.016.8a7a.html

Способ диагностирования нарушения рецептивности эндометрия у пациенток с миомой матки и бесплодием

Нарушения рецептивности эндометрия у больных тяжелыми формами

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии, и предназначено для диагностирования нарушения репродуктивной функции у пациенток с миомой матки.

Способ заключается в определении количества пиноподий в поверхностном эпителии, уровня экспрессии рецепторов прогестерона и эстрогена-альфа в строме эндометрия, их соотношения, а также уровня экспрессии имплантационного фактора LIF на 21-24 день менструального цикла (в «окно имплантации»).

При количестве пиноподий менее 35%, уровне соотношения экспрессии прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в строме эндометрия менее 3,5, а также уровне экспрессии LIF менее 2 баллов диагностируют нарушение фертильности, связанное с миомой матки.

Данный метод позволяет применять дифференцированный подход к ведению пациенток, планирующих беременность, с миомой матки, не деформирующей полость матки, а также с размерами миоматозных узлов до 5,0 см в диаметре. 2 пр., 4 ил.

Список сокращений:

ЛММ – лейомиома матки

LIF – лейкемия-ингибирующий фактор

PR – прогестероновые рецепторы

ER – эстрогеновые рецепторы

ИГХ – иммуногистохимия.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и предназначено для диагностирования нарушения репродуктивной функции у пациенток с ЛММ.

Бесплодием страдают 55,3% женщин с миомой матки, причем на долю первичного бесплодия приходится 23,3%, вторичного 32% [1]. Согласно популяционным наблюдениям, среди женщин с первичным бесплодием ЛММ выявляют у каждой третьей, а каждая пятая женщина с ЛММ страдает бесплодием [2].

По данным литературы у страдающих бесплодием в 12-20% случаев миома матки является единственной причиной репродуктивных неудач [3].

На данный момент не существует единого мнения о влиянии миомы матки на репродуктивную функцию, малочисленны исследования, посвященные механизмам нарушения фертильности при миоме матки. Роль миомы матки в развитии бесплодия до сих пор не определена, так как известны многочисленные случаи беременности с благополучным исходом при множественной миоме матки, даже больших размеров.

Существенное значение в процессе имплантации играет то, что состояние монотонно возрастает, начиная с середины поздней секреторной фазы. LIF локализован в железистом эпителии [11].

Было показано, что экспрессия LIF достигает максимального значения в период окна имплантации [12], что позволяет отнести этот фактор к биохимическому маркеру рецептивности эндометрия [13].

Некоторые исследователи отмечают, что в эндометрии женщин с бесплодием снижена экспрессия LIF, а также было показано, что при бесплодии неясного генеза значительно снижается экспрессия LIF в среднюю секреторную фазу эндометрия [14].

Задача изобретения – повысить эффективность прогнозирования бесплодия, связанного с ЛММ, на основании определения рецептивности эндометрия в период окна имплантации посредством иммуногистохимического исследования биоптата эндометрия на 21-24 день менструального цикла (в «окно имплантации»), оценить морфологические и иммуногистохимические характеристики эндометрия: количество пиноподий, уровень соотношения экспрессии прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в строме эндометрия, а также уровень экспрессии LIF для диагностирования нарушения фертильности, связанном с миомой матки.

Поставленная задача решается тем, что на основании определения уровня экспрессии PR и ER, а также их соотношения, определения уровня экспрессии LIF в эндометрии в период окна имплантации возможно прогнозирование нарушения фертильности, связанное с нарушением рецептивности у пациенток с миомой матки, и решения дальнейшей тактики ведения больных.

Определение рецептивности эндометрия необходимо проводить у пациенток:

1. Планирующих беременность, не предъявляющих жалобы на боли, обильные менструации, кровотечения, дизурию, запоры, имеющих миому матки, не деформирующую полость.

2. Предъявляющих жалобы на бесплодие (при неуточненной форме бесплодия – N97.9 по МКБ 10), имеющих миому матки до 5 см в диаметре, не деформирующую полость.

Практически способ осуществляется следующим образом:

Проводится оценка рецептивности эндометрия, включающая морфологическое и иммуногистохимическое исследование эндометрия на 21-24 день менструального цикла (в «окно имплантации»), оцениваются морфологические и иммуногистохимические характеристики эндометрия: при количестве пиноподий менее 35%, уровне соотношения экспрессии прогестероновых и эстрогеновых рецепторов в строме эндометрия менее 3,5, а также уровне экспрессии LIF менее 2 баллов диагностируют нарушение фертильности, связанное с миомой матки.

Материалом для проведения исследования является эндометрий. Взятие эндометрия для исследования производится путем кюретажа слизистой полости матки на 7-11 после овуляции, т.е. на 21-24 день классического 28 дневного менструального цикла. Предварительно проводят гистероскопию с целью визуальной оценки полости и слизистой оболочки матки.

Материалы биоптатов фиксируются в 10%-ном нейтральном формалине в течение 24 часов. Образцы обрабатываются по общепринятой стандартной методике и заключаются в парафин. Срезы толщиной 4 мкм готовятся на роторных микротомах и окрашиваются гематоксилином и эозином.

Исследование гистологических препаратов проводится в световом микроскопе при увеличении от х50 до х400.

Иммуногистохимическое исследование

ИГХ реакции проводится на депарафинировнных срезах толщиной 4-5 мкм по общепринятым протоколам (DAKO protocols).

Для определения стероидных рецепторов используются мышиные моноклональные антитела к альфа-эстрагеновым рецепторам (ЭР) (клон 1D5 «DAKO», Дания, RTV) и прогестероновым рецепторам А (ПР) (клон 636 «DAKO», Дания; RTV).

Для выявления экспрессии ЛИФ используются первичные мышиные антитела к ЛИФ (R@D Systems, USA, clone:9824).

Для анализа результатов ИГХ реакций используется метод гистологического счета H-score по формуле: HS=1а+2b+3с, где а – % слабо окрашенных клеток, b – % умеренно окрашенных клеток, с – % сильно окрашенных клеток, 1, 2, 3 – интенсивность окрашивания, выраженная в баллах.

Результаты ИГХ реакции для ЛИФ оцениваются полуколичественным методом в баллах по общепринятой методике: отсутствие иммуноокрашенных клеток (-) – 0 баллов; менее 5% иммуноокрашенных клеток (j:) – 0,5 балла, менее 20% иммуноокрашенных клеток (+) – 2 балла; от 20 до 40% окрашенных клеток (++) – 4 балла; более 40% окрашенных клеток (+++) – 6 баллов.

Рассматривается также коэффициент ПР/ЭР. Соотношение ПР/ЭР расчитывается по строме, поскольку современные представления предполагают, что именно строма играет решающую роль в успешной имплантации эмбриона и последующем развитии беременности (М.Т. Mazur, 2005).

Результаты испытаний

При исследовании гистологических препаратов в световом микроскопе при увеличении ×400 проводилось изучение поверхностного эпителия эндометрия и оценка количества клеток, содержащих пиноподии (%), необходимые для успешной имплантации.

У пациенток 1 группы количество пиноподии в поверхностных клетках эпителия колебалось от 7 до 12% и в среднем составило 9,3=1,7% (рисунок 1а), тогда как у пациенток 2 группы данный показатель варьировал от 30 до 40% и в среднем составил 34,6%±3,1% (рисунок 1б).

Таким образом, нами выявлена статистически значимая разница между количеством пиноподии у пациенток с бесплодием и пациенток без бесплодия на фоне миомы матки (Р200 баллов), достигавшая максимальных значений в клетках стромы.

Уровень ER-альфа в клетках стромы был низким, а в клетках желез умеренным (рисунок 2).

При исследовании маркера рецептивности LIF во вторую фазу менструального цикла выявлено снижение уровня LIF у пациенток с миомой матки и бесплодием.

Так, у пациенток 1 группы уровень LIF колебался от 0 до 3 и в среднем составил 1.96±0,98. Среди пациенток 2 группы уровень экспрессии LIF в эндометрии варьировал от 1 до 3 и в среднем составил 2,71±0,73. При сравнении пациенток

В обеих группах по уровню экспрессии LIF получены статистически значимые результаты.

Так, при сравнении результатов 1 и 2 группы уровень LIF у пациенток с миомой матки, не страдающих бесплодием, был почти в 1,5 раза выше, чем у пациенток с бесплодием, и составил 2,71±0,73 и 1,96±0,98 соответственно (р=0,061) (рисунок 3). Нами была выявлена зависимость между количеством узлов миомы и уровнем LIF.

Так, уровень LIF оказался выше у пациенток с единичными узлами миомы, при этом, чем больше миоматозных узлов, тем ниже уровень экспрессии LIF, что свидетельствует об отрицательном влиянии миомы матки на эндометрий (рисунок 4).

Нами получены данные, подтверждающие нарушение экспрессии стероидных гормонов в эндометрии у пациенток с миомой матки, страдающих бесплодием.

По данным нашего исследования соотношение PR/ER-альфа у пациенток с бесплодием на фоне миомы матки в среднем составило 46,71±9,48, тогда как у пациенток с миомой матки, не страдающих бесплодием, этот показатель составил 3,49±0,79.

Из вышеописанных данных следует, что причина бесплодия у пациенток с миомой матки может быть связана с нарушением экспрессии стероидных рецепторов в эндометрии.

Таким образом, нами были подтверждены данные о нарушении экспрессии стероидных гормонов в эндометрии у женщин с миомой матки, страдающих бесплодием.

Проведение морфологической и иммуногистохимической оценки эндометрия у больных миомой матки позволяет выделить группу пациенток с дисбалансом экспрессии PR и ER-альфа, которым необходимо и целесообразно проведение миомэктомии даже при небольших размерах миоматозных узлов.

Ниже следует пример, который иллюстрирует способ по изобретению.

Пациентка К., 26 лет обратилась в Центр в 2010 году с жалобами на отсутствие наступления беременности в течение 2 лет регулярной половой жизни без применения контрацепции.

Клинический диагноз: Миома матки. Бесплодие I.

Заболевания у ближайших родственников: у бабушки – сахарный диабет.

Соматических заболеваний не выявлено. Общие операции отрицает.

Гинекологические заболевания: эрозия шейки матки (лазер-коагуляция в 2007 году). Миома матки с 2006 года.

Гинекологические операции: отрицает.

Менструации с 11 лет, установились сразу. Регулярные, по 4 дня, через 28 дней, умеренные, безболезненные.

Репродуктивная функция – бесплодие I (2 года). Общее количество беременностей – 0

Половая жизнь с 19 лет.

Здоровье мужа: соматически здоров, спермограмма – нормозооспермия.

История настоящего заболевания: обратилась в Центр с вышеописанными жалобами для подготовки к беременности. При обследовании выявлена миома матки. Рекомендовано оперативное лечение.

Гинекологический осмотр: наружные половые органы развиты правильно. Оволосение по женскому типу. Шейка матки цилиндрической формы, чистая. Тело матки увеличено соответственно 9-10 неделям беременности, плотное, подвижное, безболезненное при пальпации. Придатки матки с обеих сторон не увеличены, безболезненны при пальпации. Своды глубокие, безболезненные при пальпации. Выделения – светлые.

Данные УЗИ органов малого таза (от 16.04.2010) 9 д.м.ц.: тело матки размерами 3,8*4,0*3,8 см. По задней стенке визуализируется межмышечно-субсерозный миоматозный узел диаметром 3,8 см. Полость матки не расширена. Придатки матки без патологии. М-ЭХО – 0,5 см, обычной эхо-структуры.

Операция: Лапароскопия, миомэктомия без вскрытия полости матки, гистероскопия, раздельное диагностическое выскабливание эндоцервикса и слизистой полости матки.

Обнаружено: длина тела матки 6 см. Полость не увеличена, не деформирована. Эндометрий бледно-розовый, не утолщен. Трубные углы доступны осмотру, устья маточных труб свободны.

Лапароскопия: тело матки увеличено до 8-9 нед беременности, бледно-розового цвета, деформировано межмышечно-субсерозным миоматозным узлом, расположенным по задней стенке матки, диаметром 4,5 см. Придатки без патологии. Маточные трубы при хромогидротубации свободно проходимы.

Результаты патоморфологического исследования №1285 – присланные узлы – лейомиома с гиалинозом. В соскобе обрывки плоского многослойного эпителия. Количество пинопий 25%.

Иммуногистохимическое исследование: уровень PR 220%; уровень ER 30%; PR/ER 7,3; уровень LIF 1 балл (низкий).

Через год после проведенной операции наступила самостоятельная беременность, которая протекала без осложнений и завершилась оперативными родами на 38 неделе беременности. Родился здоровый ребенок, оценен по шкале Апгар 8/9 баллов. Пациентка выписана домой в удовлетворительном состоянии на 7 сутки после родов.

Пациентка Р., 39 лет обратилась в Центр с жалобами на отсутствие наступления беременности в течение 2 лет регулярной половой жизни без применения контрацепции.

Клинический диагноз: Множественная миома матки больших размеров. Бесплодие II.

Заболевания у ближайших родственников: инсульт у матери.

Соматические заболевания: аутоиммунный тиреоидит.

Общие операции: 2001 г. удаление левой доли щитовидной железы.

Гинекологические заболевания: миома матки с 2008 г.

Гинекологические операции: кесарево сечение в 1994 г. (на 38 нед беременности, мальчик 3700/54).

Менструации с 12 лет, установились сразу, регулярные по 4 дня, через 28 дней умеренные, безболезненные

https://www.youtube.com/watch?v=XvLvr1N-2NA

Репродуктивная функция: общее количество беременностей – 1; искусственный аборт по желанию женщины – 0.

Роды I (КС в 1994 г).

Здоровье мужа 39 лет, обследован, здоров.

Половая жизнь с 20 лет.

История настоящего заболевания:

Миома матки с 2008 г., не наблюдалась, лечение не проводилось.

Гинекологический осмотр: наружные половые органы развиты правильно. Оволосение по женскому типу. Влагалище нерожавшей, слизистая не гиперемирована. Шейка матки субконической формы, чистая.

Тело увеличено до 13-14 нед беременности, плотное, подвижное, безболезненное при пальпации. Придатки матки с обеих сторон не увеличены, безболезненны при пальпации. Своды глубокие, безболезненные.

Выделения – светлые.

Данные УЗИ органов малого таза от 15.02.2010:

Размеры матки: длина 10,3, толщина 9,4, ширина 9,0 см. Миометрий – по задней стенке интерстициальный миоматозный узел размерами 78*65*76 мм, в дне субсерозный на тонком основании 44*27*33 мм. М-ЭХО 6 мм. Правый яичник размерами 3,1*2,9*2,0 см, левый яичник размерами 3,8*3,7*3,0 см. Заключение – множественная миома матки.

Источник: https://findpatent.ru/patent/255/2553340.html

Рецептивность эндометрия это

Нарушения рецептивности эндометрия у больных тяжелыми формами
Lionesska

Анализ эндометрия на рецептивность ?

Девочки, скажите кто делал иммуногистохимию эндометрия на рецептивность к эстрадиолу- прогестерону , это достоверный анализ или новомодная ерунда? Что именно он показывает? Если рецептивность снижена по этому анализу что это будет означать ? Мне предложили сделать этот анализ , я в сомнении делать или нет . Девочки, кто делал, поделитесь мнением , помог вам этот анализ или нет? Читать далее →

Натали

Рецептивность эндометрия

Мамочки будущие и настоящие, принимайте в свои ряды)) История у нас как у всех здесь нелегкая, из диагнозов – ХЭ, СПКЯ, по СГ тоже пониженные показатели. За плечами 2 протокола (свежий и крио), ХГЧ 0 оба раза(( Каждый раз подсаживали по 2 отличные крошки и ничего.

После второй неудачи стимулировали и растили клетки, чтобы сделать пайпель-биопсию проверить рецептивность энодометрия в стимулированном цикле. В результате по анализу – малое количество пиноподий в эндометрии в период окна имплантации, т.е. низкая рецептивность эндометрия…

Читать далее →

Женечка

Пайпель биопсия. Низкий % Пиноподий.

Вот вроде и нашли причину, почему мои 4 эмбриончика так и не остались со мной Читать далее →

Юля

Скоро перенос ,нужен совет

В протоколе по ОМС ИКСИ в Генезисе,19-08 пункция))..вот врача уже закидала вопросами..а прогестерон перед уколом?..а орошение матки?..а метипред?)))..прогестерон ,говорит,на твое усмотрение-все равно по омс подсадку не отменят..метипред-по показаниям-у меня к этому нет показаний..

орошение сказала,пжста,нейпомаксом можно,но это не изучено..говорят потом лейкоциты в 20 000 р в матке увеличиваются, и пока не изучено как это отразится на эмбрионах и потом в будущем на женщине(..и я вот рассторилась..уже хотела делать эту процедуру..ии..теперь не знаю.

Что еще можно промониторить сейчас? вечером укол,утром сдала прогестерон… Читать далее →

ЭКО – мама

Обсудите вашу тему в сообществе, узнайте мнение активных пользователей Бэбиблога

Перейти в сообщество

Оптимистка

Анализ Рецепторы Пиноподии

Врач  предлагает сделать анализ на рецептивность эндометрия. Читать далее →

Claire

Анализ на рецептивность эндометрия – что за зверь?

Девушки, привет!В который раз (уже четвертый протокол) возвращаюсь за ответами к любимому ББ ))Пункцию сделали 12.09., но т.к. эндометрий был тонкий и неоднородный, сразу ущли в крио и моя репр. посоветовала сделать гистеру с выскабливанием – смотреть, в чем дело. Читать далее →

Клипси

Результаты гистологии, помогите разобраться

Сегодня получила результаты гистологии эндометрия после диагностической гистеры на 9ДЦ: “Крошечные фрагменты эндометрия фазы пролиферации, единичные железы секреторного типа”. И все… После гистеры хирург сказал “Все нормально”. В выписке никакого описания, просто указано, что проведена диагностическая гистероскопия.Вопросы.1.

Что такое “единичные железы секреторного типа”? Это норма?2. Значит ли это, что нет хронического эндометрита? Как его диагностируют: визуально во время гистеры или по результатам гистологии?3. Есть ли смысл сдавать материал на имуногистохимию (рецептивность к прогестерону и естогенам), если…

Читать далее →

Dubadu

Иммуногистохимия эндометрия

Девочки, напомню, у меня в анамнезе три пролета. Эндометрий всегда ровный, пышный, трехслойный, как на картинке (по словам врача). Гистера показала,что тоже всё окей. Эмбрионы подсаживали на стадии бластоцисты, то есть всегда пятидневки отличного и хорошего качества (опять же по словам врача).

После трех пролетов назрело желание сделать иммуногистохимическое исследование эндометрия.Расскажите, кто из вас делал, где делали, больно или нет. И что дает это исследование?Можно ли корректировать эндометрий по результатам иммуногистохимии?Спасибо всем, кто не пройдет мимо. UPDДорогие…

Читать далее →

Ирина – Малина

ХРОНИЧЕСКИЙ ЭНДОМЕТРИТ: ПУТИ РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМЫ

ХРОНИЧЕСКИЙ ЭНДОМЕТРИТ: ПУТИ РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМЫ Рыбалка Анатолий Николаевич ак. КАН, д-р мед. наук, проф., заведующий кафедрой акушерства, гинекологии и перинатологии, Медицинская академия им. С.И. Георгиевского,ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского»Министерства образования Российской Федерации,РФ, Республика Крым, г.

Симферополь Сулима Анна Николаевна д-р мед. наук, проф. кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии, Медицинская академия им. С.И. Георгиевского, ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского» Министерства образования Российской Федерации,РФ, Республика Крым, г. СимферопольE-mail: gsulima@yandex.ua Яковчук Евгения…

Читать далее →

Окно имплантации Самара

Девочки привет! Особенно самарские, подскажите, вы проверяли ли эндометрий на рецептивность, т.е. во время ли открывается окно имплантации, и есть ли оно вообще? Может скажите, где у нас можно в Самаре это сделать, или только куда то ехать? Читать далее →

ТаняЯ

“Разбор полетов” и мои страхи

Девочки, на кону – решение, уйти и перевезти оставшиеся криошки в другую клинику или остаться на повторное крио в своей клинике? Страшно и то, и другое, если честно… Сомнения и страхи возникли после посещения РЕ и “разбора полетов”.

Нужны ваши мнения и советы.Кому интересно под кат. Пришла я, значит, подготовленная, с перечнем моих предположений о причинах неудач и с выпиской по офисной гистере (сделала ее в Арт Эко у Зотова 05.11, на 10 день цикла. По офисной все хорошо…

Читать далее →

Ольга

чем дальше в лес…

http://praesens.ru/assets/files/Kazan2013/doc/Morfologicheskie_markery_receptivnosti_endometriia_(dokt._biol._nauk_Bragina_E.E.).pdfссылка на презентацию: морфологические маркеры рецептивности эндометрия…проверяют эти Пиноподии во время имплантационного окна (5-7 дпо)…при помощи пайпель биопсии.

Вот думаю: стоит ли это делать? я уверена,что их количество у меня снижено благодаря чисткам. И так скажем увеличивать их можно при помощи гормонов 2 фазы-прогестерон,что я итак буду делать…уже не знаю что с мои эндиком придумать…Начались месяки раньше положенного,ранняя овуля на 13 дц (обычно на 18) и физио в том цикле дали знать о себе.

цикл 26… Читать далее →

Иммунограмма

Напомню, три протокола без имплантации. Вот, пришел результат иммунограммы. Тоже все хорошо, только cd19 повышен, не думаю что он влияет на не имплантацию. Стоит ли вообще идти к иммунологу?Смотрели все: допплер, гистеру.

пайпель на гистологию и пцр инфекции, гемостаз контролируем, АФС в норме, кариотипы норма. Во время переноса эндометрий 9-10 мм, трехслойный, эмбриончики 5дневки, 2 свежих и 1 крио.

Не смотрели только окно имплантации, но у нас нет в городе СЭМ, но можно же хотя бы на рецептивность эндометрий… Читать далее →

Крошка Енот

Имплантация

Имплантация – внедрение эмбриона в слизистую оболочку матки. Это один из ключевых моментов в развитии беременности: эмбрион миновал те стадии, когда он мог находиться в организме матери (или in vitro) в свободном состоянии. Теперь для его роста и развития необходима постоянная связь с материнским организмом… Читать далее →

Татьяна Валериевна

Иммунограмма . Где сдать и как называется . и Рецептивность

Девочки , многие мою историю знают . Для новеньких . 12 лет бесплодия , трубный фактор+ морфология 0 % + теперь добавился аденомиоз .4 полноценных пролетных протокола без имплантации.

Пролет в КРИО в ЕЦ 2 дня назад( в этот раз гемостаз был идеальный) . Спасибо всем кто поддержал , приношу извинения за истеричный пост . Я долго плакать не привыкла , оклемалась , приняла ситуацию . Девчонки еще раз всем спасибо за поддержку .

Итак , 25 еду на экспертное… Читать далее →

Dubadu

ВНИМАНИЕ, КОНКУРС!!!! Получи шанс пройти процедуру ЭКО (три цикла с ПГД) совершенно бесплатно!

Читая истории невероятной борьбы и долгожданных побед от счастливых мамочек, искренне радуешься и надеешься, что все больше людей обретут радость родительства

Источник: https://www.BabyBlog.ru/theme/receptivnost-endometriya-eto

Нарушение рецептивности эндометрия при первичном бесплодии женщин с синдромом недифференцированной дисплазии соединительной ткани и наследственными тромбофилиями

Нарушения рецептивности эндометрия у больных тяжелыми формами

Рецептивность эндометрия — это комплекс структурно-функциональных характеристик эндометрия с конкретными пространственными и временны́ми константами, определяющими способность эндометрия к имплантации [1, 2]. Согласно данным Е. Norwitz и соавт.

[3], лишь около 50—60% всех зачатий может привести к беременности с достижением срока 20 нед и более. При этом 75% потерь беременностей обусловлено нарушениями имплантации, поэтому их клинически невозможно распознать как беременность.

В целом каждая 9-я семейная пара в Европе и США имеет потери беременности, обусловленные нарушениями имплантации [4].

Женщины, страдающие наследственными тромбофилиями (НТ) и синдромом недифференцированной дисплазии соединительной ткани (нДСТ), имеют высокий риск первичного и вторичного бесплодия, а также высокий риск неудачных попыток ЭКО, что было подтверждено в ряде работ и связано с нарушениями рецептивности эндометрия [2, 5, 6].

Дисплазия соединительной ткани (ДСТ) — это полиорганная и полисистемная патология с прогредиентным течением, в основе которой лежат дефекты синтеза или катаболизма компонентов внеклеточного матрикса или регуляторов морфогенеза соединительной ткани [2]. Имеется две основные разновидности ДСТ — дифференцированная (дДСТ) и недифференцированная (нДСТ) формы [7].

Генетически гетерогенная группа заболеваний мультифакториальной природы — нДСТ, в основе которых лежат нарушения синтеза и распада внеклеточного матрикса, возникающие под действием неблагоприятных факторов внешней среды у индивидуумов с определенной генетической предрасположенностью уже в периоде раннего эмбриогенеза или постнатально и характеризующиеся нечеткой клинической картиной [2].

Согласно определению ВОЗ и Международного общества по тромбозу и гемостазу, тромбофилия — необычная наклонность к тромбозу с ранним возрастным началом, отягощенностью семейного анамнеза, степенью тяжести тромбоза, непропорциональной известному причинному фактору и эпизодам рецидивов тромбоза [8].

В клинических рекомендациях Американской коллегии торакальных врачей по антитромботической и тромболитической терапии диагноз тромбофилии устанавливается при наличии не менее одного критерия из следующего списка: дефицит антитромбина III, дефицит протеина С и S, резистентность фактора V к активированному протеину С, мутация фактора V Лейдена, мутация протромбина G20210A, гипергомоцистеинемия, гомозиготное носительство термолабильного варианта метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR), антифосфолипидных антител или волчаночного антикоагулянта, увеличение активности фактора VIII, а также сниженный уровень протеина Z [8, 9].

НТ и нДСТ нередко являются сочетанной патологией, что обусловлено общностью молекулярно-генетических механизмов развития: во-первых, многие гены, обусловливающие развитие нДСТ и НТ, находятся в соседних локусах: гены PAI-1 α2-цепей коллагена I типа расположены в одном локусе 7q22.1; ген α-цепи коллагена IV типа и гены факторов свертывания VII и X расположены в одном локусе — 13q34; а гены β3-субъединицы ламинина и фактора свертывания V находятся в соседних локусах 1q31 и 1q22 [10]. Также белок PAI-1 играет важную роль в развитии этих синдромов: с одной стороны, ингибирует фибринолиз, с другой — стимулирует процессы фиброза [11, 12]. Однако до сих пор остаются неясными морфологические и молекулярно-генетические особенности эндометрия, в первую очередь его стромы, влияющие на рецептивность эндометрия у пациенток с НТ и нДСТ.

Целью исследования является изучение морфологических и иммунофенотипических особенностей эндометрия у пациенток с первичным бесплодием на фоне НТ и синдрома нДСТ.

Исследование выполнено на пайпель-биоптатах эндометрия от пациенток (81), разделенных на 4 группы: 1-я группа — 19 пациенток с клиническим диагнозом нДСТ (средний возраст 31,9±4,5 года), 2-я группа — 40 пациенток с клиническим диагнозом НТ (средний возраст 32,6±4,8 года), 3-я группа — 13 пациенток с сочетанием клинических диагнозов нДСТ и НТ (средний возраст 32,3±4,7 года) и 4-я группа, состоящая из 9 пациенток, — группа контроля, здоровые суррогатные матери.

Критерии включения в основные группы: репродуктивный возраст, бесплодие в анамнезе, диагнозы нДСТ либо сочетание этих заболеваний. Критерии исключения: гиперпластические процессы эндометрия, тяжелая сопутствующая патология (ревматические болезни, онкологические заболевания, сахарный диабет).

Критерий постановки диагноза нДСТ — набор симптомов, выявляемых при объективном осмотре, в соответствии с рекомендациями Т.И. Кадуриной и соавт. [13]. Диагноз Н.Т.

ставился по результатам проведенного ранее генетического исследования на основании клинических рекомендаций Американской коллегии торакальных врачей по антитромботической и тромболитической терапии [8, 9].

От каждой пациентки исследовались пайпель-биоптаты эндометрия, взятые в период «окна имплантации» (6—8-й день после овуляции по данным УЗИ).

Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Приготавливали ступенчатые парафиновые срезы толщиной 4 мкм.

Часть срезов окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван Гизону, толуидиновым синим; другую часть использовали для постановки иммунопероксидазных реакций со следующими первичными антителами: к коллагену I (поликлональные кроличьи антитела, 1:500, «GeneTex», США), коллагену III (поликлональные кроличьи антитела, 1:1000, «GeneTex», США), фибронектину (кроличьи антитела, 1:100, «Dako», Дания), ламинину β2γ1 (мышиные моноклональные антитела, 1:200, «GeneTex», США), MMP-2 (поликлональные кроличьи антитела, 1:200, «Abbiotec», США), MMP-9 (поликлональные кроличьи антитела, 1:200, «Abbiotec», США), к рецепторам эстрогена (ER, клон 1D5, «Dako», Дания, готовый к употреблению), к рецепторам прогестерона (PgR, клон 636, «Dako», Дания, готовый к употреблению), к белку PAI-1 (PAI-1, клон H-135, разведение 1:100, «SantaCruz», США), к белку VEGF-A (разведение 1:100, «Abbiotec», США), к белку LIF (разведение 1:100, «Sigma», Швеция).

Депарафинирование срезов осуществляли в растворе Bioclear («Bio-Optica», Италия).

Антигенную демаскировку проводили путем инкубации в 10 мМ цитратном буфере; рН 6,0 («Dako», Дания), при автоматическом нагреве буфера до 96 °C, поддержании этой температуры в течение 20 мин.

Ставили положительные и отрицательные контроли. Контрастирование ядер осуществляли раствором гематоксилина Майера (ООО «ЭргоПродакшн», Россия) [14].

Морфометрическое исследование проводили с помощью микроскопа Zeiss Axioplan 2 imaging, оборудованного фотокамерой Zeiss AxioCam Hrc, и программного обеспечения AxioVision v.4.6.2.

Оценку площади очагов склероза при окраске по Ван Гизону и экспрессии маркеров коллагена I, III проводили с помощью морфометрического исследования: оценивали площадь экспрессии программным методом с помощью программного обеспечения AxioVision v.4.6.2.

Оценку степени экспрессии маркеров LIF, PAI-1, VEGF, MMP-2, MMP-9, фибронектина, ламинина осуществляли посредством подсчета окрашенных клеток одного типа.

Оценку 0 баллов ставили, если окрашенные клетки отсутствовали, 2 балла — от 0 до 20% включительно окрашенных клеток, 4 балла — от 20 до 40%, 6 баллов — более 40% окрашенных клеток.

Для каждой из групп рассчитывали средний балл экспрессии маркеров MMP-2, MMP-9, фибронектина, LIF, PAI-1, VEGF, ламинина и стандартное отклонение.

Оценку экспрессии ER, PgR осуществляли с помощью шкалы Histoscore. Также считали стромальный прогестерон-эстрогеновый индекс (СПЭИ) — отношение экспрессии прогестероновых рецепторов к экспрессии эстрогеновых рецепторов в эндометриальной строме по шкале Histoscore.

Статистическое исследование проводили с помощью пакетов программ IBM SPSS Statistics 22 и MS Excel.

При статистическом исследовании сравнивали средние значения различных величин, для чего использовали непараметрические статистические критерии: Манна—Уитни, Краскалла—Уоллеса, поскольку в группах отсутствовало Гауссовское распределение.

Для оценки рецептивности эндометрия морфологическому исследованию подвергали эндометрий в период «окна имплантации».

В 4-й группе в 22% случаев обнаружили признаки ранней стадии фазы секреции — в железистом эпителии эндометрия определяется множество базально расположенных вакуолей, при этом апикальный край клеток все еще ровный, строма в структурном отношении имеет сходство с таковой поздней фазы стадии пролиферации.

В 78% случаев выявлены изменения эндометрия, характерные для средней стадии фазы секреции — железы извитые с широким просветом, ядра везикулярные, располагались базально, апикальный край клеток неровный с признаками апокринной секреции в просвете желез и образованием пиноподий — микропротрузий диаметром около 6 мкм в апикальной части поверхностного эпителия эндометрия, экспрессирующих на своей поверхности ряд белков, необходимых для адгезии бластоцисты к поверхности эндометрия, а также признаки васкуляризации и отека стромы.

В 1-й группе эндометрий средней стадии секреции был найден в 38% случаев, в остальных 62% — эндометрий стадии ранней секреции.

Во 2-й и 3-й группах в 25 и 37% случаев соответственно были выявлены морфологические признаки стадии пролиферации в эндометрии: железы извитые с митозами, ядра клеток железистого эпителия округлой формы, некоторые с ядрышками, отмечалась тенденция к расположению ядер в базальной части клеток, строма компактная, ядра фибробластоподобных клеток округлой формы, относительно крупные фибробластоподобные клетки располагаются в густой сети ретикулиновых волокон.

При морфологическом исследовании эпителия эндометрия также оценивался процент зрелых пиноподий — булавовидных выростов эпителиоцитов слизистой оболочки матки в поверхностном слое эндометрия. В 1-й группе выявлено в среднем 5% зрелых пиноподий в поверхностном эпителии эндометрия, во 2-й и 3-й — по 1%, в 4-й группе — 13% зрелых пиноподий.

При оценке стромы эндометрия при окраске толуидиновым синим в 1-й и 3-й группах в строме эндометрия выявлены очаги фиолетовой метахромазии — признаки мукоидного набухания. Во 2-й и 3-й группах во всех исследованных случаях выявлены сладж и кровоизлияния в микроциркуляторном русле стромы эндометрия.

Микроскопические очаги фибриноидного некроза стромы эндометрия в 1-й группе выявлены в 68% случаев, во 2-й и 3-й группах — во всех исследованных случаях, в группе контроля — лишь в 45% случаев.

Очаги склероза, расположенные нередко периваскулярно, выявлены в 25% случаев в 1-й группе, в 53 и 68% случаев во 2-й и 3-й группах соответственно, в группе контроля они выявлены не были.

При оценке суммарной площади очагов склероза при окраске пикрофуксином по Ван Гизону в 3-й группе они составляли наибольший процент — в среднем 1,77% от всей площади препарата; в 1-й и 2-й группах он отличался незначительно — 0,85 и 1,05% соответственно, в группе контроля очаги склероза выявлены не были (рис. 1, табл. 1).

Таблица 1. Морфологическая и иммуногистохимическая характеристика очагов склероза в исследуемых группах Примечание. * — р

Источник: https://www.mediasphera.ru/issues/arkhiv-patologii/2016/6/1000419552016061023

Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) – расширенное

Нарушения рецептивности эндометрия у больных тяжелыми формами

[12-110] Иммуногистохимическая диагностика рецепторного статуса эндометрия (стадия секреции) – расширенное

17085 руб.

Исследование гистологических препаратов биопсии эндометрия, проводимое с использованием меченных флюоресцирующими веществами антител, которое позволяет выявить наличие в нем некоторых необходимых для успешной имплантации эмбриона молекул, а также маркеров определенных иммунокомпетентных клеток, присутствие которых свидетельствует о хроническом воспалительном процессе.

Синонимы русские

Иммуногистохимическое исследование определения рецептивности эндометрия “окна имплантации” (количество ER, PGR, СD56, CD138, LIF); ИГХ рецепторного статуса эндометрия, расширенное (фаза секреции (ER/PR/CD138/CD56/LIF).

Синонимы английские

Immunohistochemical test of endometrial receptivity (advanced).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани (в парафиновом блоке).

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Эндометрий – это внутренняя часть слизистой оболочки матки, обращенная к ее полости. Его основная функция состоит в создании оптимальных условий для имплантации эмбриона в матку и успешного наступления беременности.

Ведущее значение в процессе имплантации имеет рецептивность эндометрия – способность воспринимать оплодотворенную яйцеклетку и обеспечивать ее прикрепление и внедрение в полость матки.

На рецептивность оказывают влияние изменения эндометрия на тканевом, клеточном и молекулярном уровне.

Соответственно стадиям менструального цикла, эндометрий претерпевает ряд структурных изменений, которые посредством гормональной регуляции синхронизированы с процессами созревания яйцеклетки.

Так, к началу лютеиновой фазы, наступающей после овуляции (высвобождения зрелой яйцеклетки), ткань эндометрия значительно утолщается, становится более богатой железами и обильнее кровоснабжается.

Структурная перестройка эндометрия контролируется стероидными гормонами яичников – эстрогеном и прогестероном, влияние которых опосредуется через соответствующие рецепторы, располагающиеся на поверхности клеток эндометрия. Достаточный уровень и правильное соотношение рецепторов каждого гормона необходимо для подготовки эндометрия к имплантации эмбриона.

Период, когда эндометрий максимально восприимчив к имплантации оплодотворенной яйцеклетки, называется имплантационным окном.

Наиболее часто имплантационное окно наступает с 5-го по 10-й дни после овуляции (соответственно, 20-24-й дни 28-дневного менструального цикла), а его продолжительность составляет не более 48 часов.

В этот период происходит взаимодействие эндометрия и эмбриона, которое приводит к имплантации оплодотворенной яйцеклетки и наступлению беременности, в любое другое время эндометрий является нерецептивным и успешная имплантация эмбриона в него невозможна.

Наступление окна имплантации сопровождается изменениями наружного слоя эндометрия – покровного эпителия, в котором образуются мельчайшие выпячивания (пиноподии). Их образование соответствует периоду максимальной рецептивной активности эндометрия. Именно на поверхности пиноподий происходят начальные этапы присоединения оплодотворенной яйцеклетки к эндометрию.

Для данного процесса исключительное значение имеет вырабатываемый пиноподиями цитокин – LIF (Leukemia inhibitory factor, лейкемия-ингибирующий фактор), продукция которого достигает пика именно в период окна имплантации, что позволяет отнести его к молекулярным маркерам рецептивности эндометрия.

Эмбрион представляет на своих клетках рецепторы к LIF и присоединяется к участкам эндометрия с большим количеством пиноподий.

Нарушение рецептивности эндометрия в период окна имплантации, а также его взаимодействия с оплодотворенной яйцеклеткой является причиной бесплодия, невынашивания беременности и неудач схем вспомогательных репродуктивных технологий, в том числе экстракорпорального оплодотворения, при котором, по некоторым данным, более половины неудачных попыток связаны именно с патологией эндометрия.

Значительная роль в генезе эндометриальной дисфункции, сопровождающейся нарушением рецептивности эндометрия, принадлежит хроническому эндометриту.

Длительное течение воспалительного процесса в слизистой оболочке тела матки приводит к структурным нарушениям эндометрия и снижению или практически полному отсутствию на его клетках эстрогеновых и прогестероновых рецепторов.

Морфологическим субстратом хронического эндометрита являются лимфоидные инфильтраты в слое эндометрия, состоящие из лимфоцитов и плазматических клеток.

В последнее время в связи с широким применением противомикробной и противовоспалительной терапии классические гистологические признаки хронического эндометрита выявляются все реже, что может требовать проведения дополнительных методов диагностики, включая иммуногистохимическое исследование.

При адекватном лечении возможно восстановление физиологического состояния эндометрия и успешное наступление беременности.

В связи с этим диагностика рецептивного статуса эндометрия и причин его нарушения занимает важное место в определении причин бесплодия и неудачных попыток вспомогательных репродуктивных технологий.

Данное исследование включает определение на клетках эндометрия следующих маркеров:

  • ER и PR – рецепторы к эстрогену и прогестерону, а также их соотношение (PR/ER)

  • LIF – лейкемия-ингибирующий фактор;

  • CD56 – маркер лимфоцитов, относящихся к классу натуральных киллеров;

  • CD138 – маркер плазматических клеток.

Указанные маркеры выявляются посредством иммуногистохимического исследования биоптата эндометрия.

Для анализа из готового парафинового блока с помощью специального микроножа нарезают тончайшие срезы, которые затем прикрепляют к предметным стеклам и красят рутинными красителями, чтобы было возможно отличить клетки друг от друга и от межклеточного вещества.

Затем срезы на стеклах окрашиваются растворами антител, меченных флюоресцирующими метками, специфичными к одному из исследуемых маркеров.

Если на клетках эндометрия присутствует искомый рецептор, антитела связываются с ним и при просмотре стекла под специальным микроскопом можно увидеть флюоресценцию, что будет свидетельствовать о положительном результате теста. Количество применяемых растворов с антителами соответствует количеству маркеров, которые исследуются в образце. Степень флюоресценции и процент клеток, в которых она есть, лежат в основе интерпретации результатов иммуногистохимического анализа.

Для чего используется исследование?

  • Для дифференциальной диагностики причин бесплодия и невынашивания беременности, а также неудачных попыток экстракорпорального оплодотворения и других вспомогательных репродуктивных технологий.

Когда назначается исследование?

  • При клинических проявлениях дисфункции эндометрия – невынашивании беременности, бесплодии, неудачных попытках ЭКО и других вспомогательных репродуктивных технологий в анамнезе.

Что означают результаты?

При интерпретации результатов иммуногистохимического определения экспрессии ER и PR следует оценивать не только процент окрашенных антителами клеток, но и интенсивность окрашивания.

Оба эти параметра учитываются в шкале Allred, где процент позитивных клеток оценивается от 0 до 5 баллов, а интенсивность окрашивания от 0 до 3. Сумма двух показателей является итоговым баллом.

В заключении также указывается процент клеток, в которых выявлена экспрессия рецепторов к эстрогену и прогестерону, и соотношение количества рецепторов друг к другу.

Экспрессия LIF оценивается полуколичественным методом в баллах по общепринятой методике:

  • 0 баллов – (–) отсутствие окрашенных клеток;

  • 0,5 балла – (±) менее 5% окрашенных клеток;

  • 2 балла – (+) менее 20% окрашенных клеток;

  • 4 балла – (++) от 20 до 40% окрашенных клеток;

  • 6 баллов – (+++) более 40% окрашенных клеток.

Степень выраженности хронического эндометрита по маркерам иммунокомпетентных клеток CD138 и CD56 оценивают по количеству позитивных клеток в поле зрения:

  • для CD138: 0 клеток – норма, единичные клетки – слабо выраженный, 2-3 – умеренно выраженный, более 5 – выраженный;

  • для CD56: до 10 клеток – норма, повышены в два раза – слабо выраженный, повышены в три раза – умеренно выраженный, повышены более чем в 4-5 раз – выраженный.

Результат исследования обязательно содержит интерпретацию полученных данных врачом-патоморфологом. Клиническая интерпретация результатов исследования должна проводиться исключительно врачом соответствующей специальности.

Что может влиять на результат?

Качество предоставленных парафиновых блоков, опыт и квалификация врача-патоморфолога, так как иммуногистохимический метод не в полной мере стандартизирован и оценка его результатов в некоторой степени субъективна.

Важные замечания

Согласно отдельным рекомендациям, для диагностики хронического эндометрита предлагается выполнять биопсию в первую фазу менструального цикла – на 8-11-й дни, когда в эндометрии отмечается наименьшее количество иммунокомпетентных клеток.

Однако диагностика рецептивности эндометрия в первую фазу нецелесообразна, поэтому для данного комплексного исследования на рецептивный статус эндометрия и хронический эндометрит биопсию желательно проводить в сроки, указанные в рекомендациях по подготовке к исследованию.

Для проведения иммуногистохимического исследования необходимо предоставить результат гистологического заключения по предоставленному биологическому материалу, если оно уже выполнялось в другой лаборатории.

Противопоказанием к любому виду биопсии эндометрия являются беременность и острые инфекционно-воспалительные заболевания органов мочеполовой системы.

Также рекомендуется

  • Планирование беременности – здоровье партнеров (для женщин)
  • Планирование беременности – здоровье партнеров (для мужчин)
  • Планирование беременности – гормональные анализы
  • Обследование женщин при планировании ЭКО (2-5 день цикла)
  • Гормональные анализы при планировании ЭКО (20-23 день цикла)
  • Обследование мужчин при планировании ЭКО
  • Панель “Ответ на стимуляцию яичников при ЭКО” – 4 маркера
  • Диагностика хронического эндометрита: CD20+, CD56+, CD138+, HLA-DR
  • Исследование рецептивности эндометрия: рецепторы к эстрогенам, рецепторы к прогестеронам (в строме и железах эндометрия), Ki67 (индекс пролиферативной активности), (кроме PTEN)

Кто назначает исследование?

Гинеколог, репродуктолог.

Литература

  • Endometrial receptivity. Aboubakr M. Elnashar, Gamal I. Aboul-Enein. Middle East Fertility Society Journal, Vol. 9, No. 1, 2004. Pages 10-24.
  • Эндометриальная дисфункция: алгоритм гистологического и иммуногистохимического исследования. Г. Х. Толибова, Т. Г. Траль, М. А. Клещёв, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск  4,  том  LXIV,  2015. С. 69-77.
  • Рецептивность эндометрия: молекулярные механизмы регуляции имплантации. Ю. С. Крылова, И. М. Кветной, Э. К. Айламазян. Журнал акушерства и женских болезней. Выпуск  2,  том  LXII,  2013. С. 63-74.
  • Проблемы коммуникации эмбриона и эндометрия: маркеры нарушений и механизмы влияния. О. А. Мелкозерова, Н. В. Башмакова, А. В. Есарева. Российский вестник акушера-гинеколога, №5, 2016. С. 29-36.

Источник: https://helix.ru/kb/item/12-110

Medic-studio
Добавить комментарий